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姜黄素脂质体稳定性研究 姜（c）是姜科姜（c）属植物的有效提取物。是世界卫生组织、世界粮食组织、欧盟国家等都允许使用的天然黄色食物色素,其安全无毒,可广泛用于糖果、糕点、饮料及酒制品的调色剂。现代药理学研究已经证明,姜黄素具有抗炎、利胆、抗氧化、抑菌、降脂以及提高免疫力等作用。20世纪90年代研究发现,姜黄素可抑制HIV复制,抑制癌细胞的转移、增长,特别对肺癌,肝癌,胃癌有着很好的抑制作用。目前在食品工业中,姜黄素主要以显色作用而作为食品添加剂,而其营养和药理功能亦拓展了姜黄素作为功能性食品研究与应用的范围。由于姜黄素不稳定且在体内易代谢失活,故采用脂质体技术将其包裹于磷脂球状囊泡中,以提高稳定性。本文主要针对姜黄素及其脂质体的稳定性进行研究,为其功能性食品的开发提供参考。 1 材料和方法 1.1 仪器、试剂与标准品 HH-2数显恒温水浴锅:国华电器有限公司;760 CRT(棱光)双光束紫外可见分光光度计:上海精密科学仪器有限公司;RE-52旋转蒸发仪:上海亚荣生化仪器厂;台式离心机:上海安亭科学仪器厂;姜黄素原料药、卵磷脂、VE:国药集团化学有限公司;姜黄素标准品:中国药品生物制品检定所;胆固醇:北京鼎国生物技术有限责任公司。 葡萄糖:天津市化学试剂六厂;其他试剂:分析纯。 1.2 实验方法 1.2.1 散法制备姜黄素脂质体的制备 脂质体的制备方法常用的有薄膜分散法、乙醇注入法、乙醚注入法、逆向蒸发法等,经过实验研究,采用薄膜分散法制备的姜黄素脂质体具有较高的包封率,其制备方法如下:精密称取卵磷脂0.1 g和胆固醇0.1 g于梨形瓶中,加入10 m L乙醚,振摇溶解,再加入姜黄素无水乙醇溶液1m L,于旋转蒸发仪上35℃减压蒸干成膜,然后加入磷酸缓冲盐溶液40m L,旋转使膜溶解,放置水合,超声,过0.8μm滤膜即得。 1.2.2 脂质体的分离 在200 nm到600 nm波长范围进行扫描,确定其最大吸收波长,实验采用高速离心法(转速10000 r/min)分离脂质体,将分离后的脂质体用无水乙醇溶解。建立紫外分光光度法对姜黄素进行含量测定,并考察该测定方法下稳定性、精密度、重复性、加样回收率、浓度与吸光度的线性关系并由此计算其浓度。 1.2.3 脂质体吸光度测定 考察自然光对其影响,取姜黄素无水乙醇溶液与脂质体置于恒温条件下,自然光照射,在一定时间间隔内进行取样,测定其吸光度值并考察其浓度变化。 1.2.4 温度对姜黄素测定的影响 取姜黄素乙醇溶液及其脂质体,避光放在不同温度水浴条件下,定时测定吸光度,并计算姜黄素溶液浓度,考察温度对其影响。由于温度升高影响脂质体的渗漏率,故同时考察姜黄素脂质体的渗漏率,其计算公式如(1): 1.2.5 测定总光度值。对于c 配制不同p H值的溶液,加入姜黄素乙醇溶液与其脂质体样品,测定其吸光度值。并分别测定20 h与40 h时姜黄素脂质体在不同p H环境中其吸光度的变化,计算其浓度,考察不同p H值对姜黄素及其脂质体的影响。 1.2.6 姜黄素乙醇溶液及脂质体吸光度测定 分别配制0.01 mol/L氯化钙溶液、氯化镁溶液、氯化锌溶液、氯化铜溶液、氯化铁溶液、氯化钠溶液,在避光恒温条件下分别加入姜黄素乙醇溶液及脂质体样品,测定其吸光度值并考察浓度变化。 2 结果与分析 2.1 收度与线性关系 姜黄素在425 nm处有最大吸收波长,在2.012~4.024μg/m L范围内浓度与吸收度呈良好的线性关系(r=0.9996),其线性曲线见图1。 经过方法学验证,采用的测定方法其稳定性RSD%为1.25、精密度RSD%为0.84、重复性RSD%为1.59、加样回收率为98.75%,其RSD%为2.20,包封率均在65%~73%之间。该测定方法准确、可靠。 2.2 光照对姜黄素稳定性的影响 日光对姜黄素及其脂质体影响结果见图2与图3。 光照对姜黄素的影响较大,由图2可知,姜黄素受光照影响较大,由实验可知,0.3 mg/m L的姜黄素溶液在光照条件下其浓度在8 h时趋于低值,11 h后完全分解。而由图3可知,姜黄素脂质体分解较为缓慢,在140 h内其含量仅下降了0.03 mg/m L,故脂质体技术可以有效地降低姜黄素的光敏性,延长其保存时间。 2.3 温度对姜黄素的影响 温度对姜黄素及其脂质体影响结果见表1与表2。 由表1及表2可知,姜黄素对热不敏感,温度的升高对姜黄素无明显影响。对于其脂质体在70℃以下温度对姜黄素的稳定性影响较小,但渗漏率总体呈上升趋势,而在70℃时,其渗漏率明显增大,主要是由于温度升高其脂质膜的流动性增强,磷脂的排列无序性与流动性增大,导致渗漏加速。 2.4 碱接触碱性试剂 不同p H值对姜黄素及其脂质体影响结果见图4。 在酸性条件对姜黄素无明显影响,在p H7.5时,姜黄素立刻