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中药对hsv的体外抗病毒活性研究 一些疾病历史悠久，易于复发，西药很难完全治疗。本课题选择了28种中草药进行沙眼衣原体和单纯疱疹病毒(HSV)的敏感性的体外筛选,以期发现能用于临床的药物。现报告如下。 1 材料和方法 1.1 hsv1型导药株 沙眼衣原体标准株J株和L1株,由美国疾病控制与预防中心(CDC)引进,本室保存。HSV1型Sam株,由江苏省南京医科大学病毒室引进;HSV-2333株,由本所药研室惠赠,为国际标准株。Vero细胞和McCoy细胞,分别购自中国科学院上海细胞生物所细胞库和由美国CDC引进。 1.2 山豆根、半边莲、小青叶、灰炭草种 天花粉、栀子、贯众、连翘、板蓝根、炙百部、地骨皮、生大黄、蒲公英、知母、山豆根、半边莲、扁蓄草、黄柏、射干、木通、黄连、炒黄芩、莪术、茵陈、苦参、野菊花、大青叶、金银花、鱼腥草、甘草、紫草、青蒿,共28种。将草药煎取后浓缩,用细胞维持培养基配制成浓度为20mg/ml的母液,-20℃保存备用。 1.3 细胞毒性试验 用细胞培养维持培养基将药物母液连续对倍稀释,共6个稀释度。待细胞在96孔培养板上基本长成单层后,加入以上对倍稀释的药液,培养3~7天。每日观察细胞病变(CPE),测定最大无毒浓度(TD0)。同时设置无药对照。 1.4 细胞内三种常用检测 用细胞培养维持培养基将TD0药液连续做对倍稀释,共3个稀释度。待McCoy细胞在96孔培养板上基本长成单层后,接种适宜浓度的沙眼衣原体毒株。离心,吸去接种的毒株,加入以上对倍稀释的药液。培养箱中培养3天,碘染色,观察细胞内包涵体形成。计算半数有效浓度(IC50)和最小抑制浓度(MIC)。同时设置未感染细胞、感染细胞(未加药液)孔作为对照。以上实验均重复2次。 1.5 hsv毒株与未感染细胞实验 用细胞培养维持培养基将TD0药液连续作对倍稀释,共3个稀释度。待Vero细胞在96孔培养板上基本长成单层后,接种适宜浓度的HSV毒株。加入以上对倍稀释的药液,培养箱中培养3~7天,显微镜下观察CPE。计算IC50和MIC。同时设置未感染细胞、感染细胞(未加药液)孔作为对照。以上实验均重复2次。 2 结果 2.1 td0的范围 28味中药中,大多数对Vero细胞和McCoy细胞的TD0基本相似,其范围在0.08~10mg/ml之间。但个别中药对两种细胞的TD0相差较大,如板蓝根、炙百部、半边莲等。 2.2 对hsv和沙眼瞳气的影响 由表1可见,28种中药中,天花粉、生大黄、野菊花对HSV有体外抗病毒活性,其MIC和TD50接近。天花粉的抗HSV作用强于生大黄和野菊花。生大黄、黄莲、炒黄芩、苦参、鱼腥草对沙眼衣原体有体外抗病毒活性,其MIC和TD0接近。黄莲的抗沙眼衣原体作用强于其它几种中药。生大黄对HSV和沙眼衣原体均有体外活性。其余药物的体外抗HSV和沙眼衣原体活性不明显。 3 中药复方对hsv的作用 中药对于性病,特别是一些久治不愈、病程长的病症,如持续性复发性非淋菌性尿道炎、复发性生殖器疱疹、复发性尖锐湿疣等,有着广阔的治疗空间。国内有学者通过体外试验发现,穿心莲、车前子、栀子、地肤子、牡丹皮、瞿麦、茯苓皮、猪苓、茵陈、金银花、秦皮、紫花地丁等中药具有体外抗沙眼衣原体作用。我们发现的抗沙眼衣原体作用的中药与其他研究者的报告有所不同,说明这些中药具有一定的临床应用价值。 国内对中药抗HSV体外作用的研究较少。有报告采用动物模型检测中药复方对HSV的作用。我们筛选出3种对HSV有效的中药,值得进一步研究和临床试用。 我们所检测的中药具有清热解毒、补肾益精等效用。但是,中药对病原微生物的作用机理尚不完全明了,体外试验有效者不一定体内有效,但体外试验结果可为临床处方配伍等提供线索,也为今后进一步研究中药有效成分打下基础。