第六章兽药残留检测技术苯并咪唑类1.pptVIP

3、薄层色谱法 TLC作为半定量分析方法,适合于食品中苯并咪唑类残留检测的筛选。 Norman等采用TLC和荧光检测法(λex 302nm, λem360nm)测定柑橘类水果中的TBZ。 White等采用TLC法检测农作物中MBC残留,板上喷雾一层荧光指示剂,用氯仿-醋酸盐-乙酸混合溶剂(190+10+4)展开,在254nm处紫外检测,检测限为50μg/kg。 Corti等采用TCL法检测马铃薯中TBZ和其他残留物,样液滴加在C8板上,用乙醇-水(10+3)展开,在248nm处紫外检测,但这种方法的灵敏度比高效液相色谱法低。 第三十页，共四十八页。 Corti等还采用TLC法还测定了水果中BEN、MBC和TBZ,以氯仿-环己胺-甲醇(6+1+01)作展开剂,在NH2-HPTLC板上将MBC和TBZ的残留物分离出来,285nm处紫外检测。 Abjean等建立了TLC法检测肝组织中ABZ-NH2-SO2的筛选方法,以乙腈-氢氧化铵(10+0.6)作展开剂,在涂有荧光指示剂的硅胶板上将ABZ-NH2-SO2分离出来,检测限低于500μg/kg。 第三十一页，共四十八页。 4、免疫分析法 免疫分析法是一种简便、灵敏、选择性高的检测方法。 一般情况下,生物样品如血浆、血清、牛奶能够直接测定或者稀释后测定。 早期,放射免疫法被应用于测定动物组织和农作物中的苯并咪唑类残留。 Nerenberg等建立了放射免疫法检测血浆中的OFZ,多克隆抗体通过兔免疫接种OFZ和多聚赖氨酸载体培养得到,后来这种方法应用于绵羊脂肪组织中OFZ残留的检测。 Newsome等采用多克隆抗体、放射免疫法检测农作物中BEN及其主要代谢产物MBC,多克隆抗体通过兔接种半抗原-2-氨基苯并咪唑和人血清蛋白培养得到。 第三十二页，共四十八页。 ELISA检测 近来,ELISA被普遍应用且大大超过了放射免疫检测法。 Brandon等建立了一种竞争性ELISA法检测肝组织中的TBZ残留,单克隆抗体通过鼠接种TBZ和5-OH-TBZ半抗原,在牛血清蛋白(BSA)中培养得到。 他们发现,用TBZ免疫得到的抗体对TBZ和5-OH-TBZ特异性高,而用5-OH-TBZ免疫得到的抗体特异性较差,对CAM和TBZ-NH2有交叉反应。对不含噻唑环的苯并咪唑类药物(如:ABZ、MBZ和FBZ),结果表明没有明显的交叉反应。 第三十三页，共四十八页。 基于辣根过氧化物酶结合(HRP)的竞争性ELISA法已被用于肝组织提取液以及水果、蔬菜和果汁中TBZ的检测,果汁样品稀释后可直接检测。 Brandon等研制出一种鼠单克隆抗体,通过鼠接种ABZ的琥珀酰胺半抗原和BSA载体制得的抗体,对11种苯并咪唑氨基甲酸酯有良好的交叉反应,包括ABZ、FBZ、OXI、MBZ、FLU、MBC和一些代谢产物,但对噻苯达唑类(TBZ、CAM和5-OH-TBZ)没有交叉反应。 另外,他们还建立了一种基于辣根过氧化物酶结合的竞争性ELISA法,用来检测牛肝提取液中的苯并咪唑残留, 后被用于牛奶中FBZ残留的检测;牛奶样品测定前用PBS-Tween-BSA稀释。 第三十四页，共四十八页。 Bushway等应用ELISA试剂盒对加工或未加工的果蔬中TBZ残留检测进行了评估,用BEN-MBC半抗原制得的多克隆抗体对TBZ有显著交叉反应,可被用于食品中的检测。 Newsome等建立了ELISA法检测农作物中BEN和TBZ残留,多克隆抗体通过兔免疫接种制得,抗原是由人血清蛋白和TBZ、MBC(BEN的降解产物)的琥珀酰胺半抗原相偶合得到。 Crooks等研制出一种多克隆抗体,对8种苯并咪唑氨基甲酸酯类药物有交叉反应。以ABZ琥珀酰胺和HAS载体蛋白偶合物作为抗原,抗体通过羊免疫接种制得,建立了基于HRP的竞争性ELISA法检测牛肝组织中的苯并咪唑类残留。 第三十五页，共四十八页。 5、气相色谱法 只有少数苯并咪唑类药物(如:TBZ、5-OH-TBZ)可直接用GC法分析。 Lafuente等采用硅酮键合相的毛细管柱(10m× 0.53mm)分离水果中TBZ残留物,分别用氮磷检测器(NPD)和电子捕获检测器(ECD)检测,发现NPD检测的灵敏度更高,LOD为10μg/kg。 Oishi等采用GC-NPD法检测TBZ,石英毛细管柱(25m× 0.2mm)分离,LOD为10μg/kg。 大部分苯并咪唑类药物极性较高,难以气化,热稳定性差,故GC法分析需要衍生化。 第三十六页，共四十八页。 衍生化 由于苯并咪唑类分子结构上含氨基和羟基,可与衍生剂发生酰化、硅烷化和烷基化反应。 常用的酰化衍生剂有三氟乙酸酐(TFA)、七氟丁酸酐(HFB)和五氟苄基酰氯(PFB-CO-Cl); 硅烷化试剂有N,O-双三甲硅基乙酰胺