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酶复习题 1. 名词解释 ：不可逆性抑制，底物抑制，别构抑制剂，酶的 自杀性底物，酶的激活剂，酶偶联的定法， 2. 酶的提取典型的抽提液由哪些组 组成？ 3. 酶的提取及纯化的注意事项。 4. 列举至少五种酶的纯化方法。 5. 酶的纯度指标鉴定。 6. 什么是对照实验？简述其类型及方法。 7. 酶纯化过程中实验记录的项目。 8. 酶纯化过程中的注意事项。 9. 酶的分子量测定方法。 10. 酶活力测定方法类型及特点。 11. 写出米-曼式方程式并简述 Km 的意义。 12. 何为酶促反应初速率？反应时 、酶的浓度、底物浓度 及反应的平衡常数与初速率有何关系？ 13. 简述双分子反应的类型及机制特点。 14. 简述可逆性抑制的动力学特点。 15. 如何设计实验检验抑制类型是否可逆？ 16. 列举基因工程中重要的工具酶及其作用。 1 名词解释 ： 不可逆性抑制，不可逆性抑制作用（修饰抑制） ：抑制剂与酶的 必需基团共价结合，引起酶活性丧失，抑制剂不能用超滤、透析、凝 胶过滤等方法除去。 底物抑制:一分子底物与酶的一个位点结合，另一底物与酶的 另一位点结合,往往出现死端复合物，对酶产生抑制作用。过量的 底物可视为反竞争性抑制作用。 别构抑制剂 ：抑制剂与酶活性中心外的部位结合，通过改变酶 的空 构象，从而影响酶与底物的结合，或影响酶的催化效率。这 种抑制剂称为别位抑制剂（allosteric inhibitors），别构抑制剂，或变 构抑制剂。 酶的自杀性底物 ：Kcat 型不可逆抑制剂又称酶的自杀性底物， 也是底物的类似物，酶的自杀性抑制剂可以作为酶的底物与酶活 性中心相结合，生成酶-底物复合物，并接受酶的催化作用。然而， 经催化后的中 间产物不游离出产物，而是转化为酶的抑制剂，进 一步与酶活性中心共价结合，对酶产生抑制作用。自杀底物都有 其自身的作用对象，专一性很高 酶的激活剂 ：是指能提高酶促反应速率的物质，此物质不是酶 和酶的底物。其中通过与酶分子结合来提高酶促反应速率的激活 剂称为酶的激活剂（enzyme activator）。 酶偶联的定法 ：是利用酶作为分析试剂，对一些酶的活性和一 些化合物（底物浓度、激活剂、抑制剂、酶的辅助因子、嘌呤、核苷 酸等）进行定量分析的一种方法。 1 酶的提取典型的抽提液由哪些组 组成？抽提液的选择  典型的抽提液由以下七方面组 组成（可 根据需要予以取舍）：抽提液包括：  离子强度调节剂：KCl、NaCl、蔗糖(细胞 内的离子强度=0.3mol/L)  pH 缓冲液 ：各种缓冲液  温度效应剂 ：甘油、二甲亚砜  蛋白酶抑制剂： 苯甲磺酰氯 （phenylmethylsulfonyl fluoride，PMSF)、二异丙基氟磷酸（异氟磷， diisopropyl  fluorophosphate，DIFP)  抗氧化剂：二硫苏糖醇（dithiothreitol DTT）、-巯基乙醇(2-mercapto- ethanol -ME)  重金属络合剂：EDTA、柠檬酸  增溶剂：TritonX-1