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糖尿病免疫炎症问题的研究 　　摘要：本研究从Th亚群角度及CRP水平进一步应证了免疫炎症与2型糖尿病的发生有密切的关系，为2型糖尿病发病机制的研究提供了新的资料。目的：检测2型糖尿病患者外周血Th1/Th2淋巴细胞及血清高敏c-反应蛋白（hs-CRP）的水平，以探讨免疫炎症与2型糖尿病的关系。方法：运用三色荧光标记法流式细胞术检测外周血中Th1/Th2淋巴细胞，用ELISA法测定hs-crp。结果：①2型糖尿病患者Th1数，Th1/Th2比值与正常对照组相比明显降低（P0.01），Th2数与正常对照组无明显差异。2型糖尿病患者外周血Th1淋巴细胞和HbA1c呈负相关关系（r=-0.688，P0.01）。②2型糖尿病患者血清hs-CRP与正常对照组相比明显升高（P0.05）。糖尿病患者血清hs-CRP浓度与胰岛素敏感性指数呈显著负相关（r=-0.38，P0.01），与甘油三酯（r=0.33，P 0.05）、体重指数（r=0.42，P0.05）和空腹血糖（r=0.46，P 0.05）有正相关关系。结论：2型糖尿病患者存在Th1/Th2淋巴细胞的失衡，血清hs-CRP水平与胰岛素抵抗程度有显著正相关，免疫炎症可能参与了2型糖尿病的发病。 　　关键词：2型糖尿病；Th细胞；高敏c-反应蛋白；免疫炎症；流式细胞术 　　 　　2型糖尿病患者存在细胞和体液免疫的异常已受到越来越多的关注，本研究通过测定外周血Th1和Th2淋巴细胞及血清hs-CRP水平，旨在进一步明确免疫炎症与2型糖尿病的关系。 　　1材料与方法 　　（1）对象和材料 　　1）对象 　　正常对照组25例，男12例，女13例，健康体检者，年龄（50.5±6.0）岁，汉族，无糖尿病及其它自身免疫性疾病。糖尿病组：新诊断的2型糖尿病患者60例，男32例，女28例，系本院内分泌科住院患者，年龄（52.9±9.7）岁， 44~78岁。入组患者均无糖尿病急慢性并发症，也无自身免疫性疾病、感染、肿瘤等。 　　2）试剂与仪器 　　PERCP标记的抗CD4单抗，PE标记的抗IL-4单抗， PITC标记的抗IFN-γ单抗，（均为鼠抗人）。FITC和PE， PERCP标记的鼠IgG1同型对照免疫球蛋白、佛波醇乙酯（PMA）、离子霉素（Ionomycin），布雷菲德菌素A（BFA）和FixPerm破膜剂均购自美国Caltag公司。hs-CRP试剂盒（晶美生物工程有限公司）；胰岛素（INS）试剂盒（天津九鼎生物技术有限公司）；流式细胞仪为美国Coul-ter公司EPICS-XL型。 　　（2）方法 　　1）Th1/Th2流式细胞术检测 　　肝素抗凝血5m，l淋巴细胞分离液分离单核细胞，将细胞数调整至1×106ml-1，将细胞悬液加入24孔细胞培养板中，加入刺激剂PMA（20μg/ml），离子霉素（1μg /ml）和蛋白质转运抑制剂BFA（2μg /ml）以阻止细胞因子向细胞外分泌。37℃、5% CO2环境下培养5小时，对细胞表面抗原进行染色，加入破膜剂进行固定-破膜打孔以利于细胞因子单抗进入细胞，进行细胞内细胞因子染色，每管加入10μl IFN-γ单抗和IL-4单抗，以相应的同种型对照IgG单抗作对照染色，应用流式细胞仪对分泌INF-γ的CD4+细胞Th1和分泌IL-4的CD4+细胞Th2进行检测。 　　2）血清hs-CRP的测定 　　取晨起空腹静脉血2m，l用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）测定。 　　3）血糖、胰岛素及相关指标的测定 　　空腹10小时取晨血5 ml测定空腹血糖（FBG、葡萄糖氧化酶法）、空腹血清胰岛素（FINS放射免疫法）。HomaB胰岛素分泌指数=20×空腹胰岛素/（空腹血糖-3.5），是评价胰岛β细胞分泌功能的一个指标，胰岛素敏感性指数ISI=LN[1/空腹血糖（mmoL/L）×空腹胰岛素（mU/L）]是评价胰岛素抵抗的一个指标。糖化血红蛋白（HbA1c），免疫分析法，德国Ba-yer公司DC2000型HbA1c检测仪及检测试剂盒。 　　（3）统计方法 　　采用SPSS8.0统计软件包作统计学分析。资料均采用-x±s表示，组间比较用单因素方差分析，以P0.05为有统计学意义。相关分析用直线相关。 　　2结果 　　（1）2型糖尿病患者外周血Th1/Th2淋巴细胞与血清CRP及临床资料与正常组比较 　　2型糖尿病患者的Th1数，Th1/Th2比值较正常组显著下降（P0.01），Th2数与正常组无明显差异。2型糖尿病患者血清CRP浓度显著高于正常对照组（P0.05），HomaB较正常组显著下降（P0.01）。 　　（2）2型糖尿病患者外周血Th1/Th2淋巴细胞及血清CRP水平与胰岛素敏感性指数等相关性分析 　　相关分析显示，2型糖