GB/T 5413.19-1997婴幼儿配方食品和乳粉　游离生物素的测定.pdf

GB/T 5413-19--1997 前 言 木标准等同采用美国公职分析化学师协会(AOAC)方法。 木系列标准从实施之日起，代替GB5413-85. 木标准由中国轻工总会提出。 木标准由全国乳品标准化中心归日。 木标准负责起草单位:国家乳制品质量监督检验中心。 木标准参加起草单位:卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻下业研究所、哈尔滨森永乳品有限公 司、雀巢(中国)投资服务有限公司。 木标准主要起草人 :张玉杰、工芸、杨金宝。 中华人 民共和 国国家标准 婴 幼 儿 配 方 食 品和 乳粉 GB/T 5413-19-1997 游 离 生 物 素 的测 定 代甘CB5413-85 Milkpowderandformulafoodsforinfantandyoungchildren --ile亩erminationoffreebionincon宜ent 1 范围 木标准规定了用微生物法测定游离生物素的方法。 木标准适用于婴幼儿配方食品和乳粉中游离生物素的测定。 2 方法原理 通过植物乳杆菌(肠d汉.‘t。护al:勿，.)生长情况来测定游离生物素含量。 3 试剂、菌种和培养基 所有试剂，如未注明规格，均指分析纯;所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。 3.1 生物素:标准品。 3.2 乙醉:体积分数为50%. 3 菌种:植物乳杆菌(Lactobactillusplantorum). 4 培养墓 4.1乳酸杆菌琼脂培养基:光解陈I殆，屏母浸青殆，荀萄钟I飞，番茄汁 10O.L,磷酸二氧钾跄，聚 III梨糖单油酸酚Ig.琼脂I飞，燕馏水10OOmL,pH6.8士0.2(25)C). 4.2 乳酸杆菌肉汤培养基:光解陈l5g,醉母浸青殆，葡萄械log,番茄汁 lOOrnL.磷酸二氧钾翔，聚 [h梨械单油酸酷18,蒸馏水10OOmL,pH6.8土0.2(2510. 4.3生物素测定用培养基:维生素测定用酪蛋白氨基酸I跑，浦萄糠49g,乙酸钠20g,L-耽氨酸 0.饱,DL一色氨酸0.翱.硫酸腺1-1吟20.g,盐敌鸟III吟20mg,尿啥IQ2OFng,盐酸硫肢素2mg,核黄素 2-g.烟酸Zmg,泛酸钙2mg,9酸毗哆N72-g,p-氨墓笨pp酸200pg,54酸氧二钾18,磷酸二氧钾Ig,硫 酸镁0.4g,盆化钠20rng,硫酸亚铁20.gI硫酸锰20mgI加蒸馏水至I000,nL，pH6.7士0.1(25C). 4 仪器 常用微生物实验室仪器及pH训. 5 制备 5.1 菌种的制备 5.1.1液体培养基的制备 吸取定量的墓础液体培养基，加入等里的燕馏水，舟个培养管分装IO.LI盖上盖,121℃灭菌 1nin.迅速将灭菌管冷却，避免颜色形成。贮于冰箱中。 国家技术监普局1997-05-28批准 1998-09-01实施 GB/T541119-1997 5.1.2 植物乳杆菌(L.d.b-W-pI-i- )贮备管的制备 将所用的微生物菌种接种到2个以上琼脂培养塞试管内，在28-40℃之间选择一个恒定温度 (士0.5,C)培养6-24h,完成后放入冰箱。 在使用新的菌种用于一个测定时，要在1-2周内做几个继代转接。 不要用保存一周以上的培养基接种，培养基在保存过程中不要打开。 5.1.3接种的准备 将植物乳杆菌U-IobactUusplanta，二))(3.3)转接到一个无菌的IO.L液体培养基中，得到一个 菌AU液。 5.2 标准滚液的制备 5.2.1生物素标准贮备液:浓度5体8八L. 精确称取50-60rng生物素标样(3.1)(从十操器中)，用乙醉(3.2)稀释，得到5U /mL的生物素 滚液，贮于冰箱中。 5.2.2 生物Al标准T作液:浓度0.lng/mL. 吸 IML标准贮备液(5.2.1),用水稀释到IOoomLI再分别吸此稀释溶液各IML，一个稀释到 500mL，作为高浓度标准溶液，一个稀释到IOoomL