GB/T 5413.14-1997婴幼儿配方食品和乳粉　维生素B12的测定.pdf

GB/T5413-14-1997 自ii 言 本标准等效采用美国公职分析化学师协会(AOAC)方法，方法准确、灵敏度高。 本系列标准从实施之日起，代件GB5413-85} 本标准由中国轻工总会提出。 本标准由全国乳品标准化中心归口。 本标准负责起草单位:国家乳制品质量监督检验中心。 本标准参加起草单位:卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公 司、雀巢(中国)投资服务有限公司。 本标准主要起草人:张玉杰、王芸、殷晓红、吕为群。 中华 人 民共 和 国 国家标 准 婴 幼 儿 配 方 食 品和 乳 粉 GB/T5413-14-1997 维 生 素B12的测 定 代替GB5413-85 MilkpomAerandformulafoodsforinfantandyoungchildren 一」XterminationofvitaminB12content 范围 本标准规定了用微生物法测定维生索B,:的方法。 本标准适用 」;婴幼儿配方食品和乳粉中维生索Bi:的测定。 方法原理 莱十曼氏乳酸杆菌(Lactobacillusleichmannii)对维生素B,:的存在具有极高灵敏性。利用这种特异 性可定量测出样品中维生素1312的含量。 试剂、菌种和培养基 所有试剂，如未注明规格，均指分析纯;所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。 3.1 生RA-水:99/L. 3.2 乙醉:体积分数为25%. 3.3 无水磷酸氢二钠。 3.4 无水偏垂W.硫酸钠。 3.5 柠檬酸(含一个结品水)。 3.6 菌种:莱士曼氏乳酸杆菌(Lactobacillusleichmannii). 3.了 培养草. 3.7.1乳酸杆菌琼脂培养A:光解陈15g,酵母is}膏5g,葡萄掂log，番茄汁lOOmL,磷酸 二氢钾2g,聚 w梨掂单油酸酷lg琼脂log,蒸馏水10OOmL,pH6.8士0.2(25C). 3.7.2 乳酸杆菌肉汤培养A.:光解陈15g,酵母i}}膏5g,葡萄掂log，番茄汁IOOmL,磷酸二氢钾2g,聚 di梨掂单油AhIIg,蒸馏水l000mL,pH6-8士0.2(25C). 3.7.3 维生素B12测定用培养基:无维生素酸水解酪蛋白15g,葡萄糖40g，天门冬酸胺0.2g，柠檬酸钠 20g，抗坏血酸4g,L-肤氨酸0.4g,DL一色氨酸0.4g,硫酸腺*11,吟20mg,盐酸鸟M,吟20ing，尿rkl咙20mg, 黄嚓吟20ing，核黄索1mg,盐酸硫胺素lmg，生物素I印9，烟酸2mg,p-氨基苯甲酸2mg，泛酸钙1mg, 盐酸毗哆醉4mgI盐酸毗哆醛4mgI盐酸毗哆胺80印9，叶酸20体91磷酸二氢钾Ig,磷酸氢 几钾Ig,硫酸 镁0.4rng,氯化钠20mg,硫酸W.铁20rngI硫酸锰20mg,聚L}梨掂单油(#ffi2g,蒸馏水10OOmL,pH6.0 士0.2(25℃). 3.8 维生索B12:标准品。 国家技术监督局 1997-05-28批准 1998一09一01实施 GB/T5413-14-1997 仪器 常用实验室仪器及: 分光光度计。 制备 5.1 菌种的制备 5门-I将保存在直柱状乳酸杆菌琼脂培养itl中的莱士曼氏乳酸杆菌接种到新的培养ilt中。培养后再转 接一次，然后再将土从〔固体培养基上转接到乳酸杆菌肉汤培养X.-中培养。 5.1.2 将乳酸杆菌肉汤中的培养液以20OOr/min离心2-3min，倾出上清液 ，加入10inL生理盐水 (3.1)，搅匀，再离心2-3min,如此清洗3-4次，吸0.4mL该菌悬液于IOML盐水((3.1)中，待测。 5.1.3 用分光光度计，以生理盐水((3.1)做空白，于55omn波长下测5.1.2中菌悬液的透光率，此时应 在60Yo-80%之fFli. 5.2 标准溶液的制备 5.2.1维生素B12标准V各液，浓度为100tig/mL. 精确称取维生索