邯郸一株C群脑膜炎奈瑟菌的分子生物学特征分析黄亮赵丽萍.DOC

邯郸市一株C群脑膜炎奈瑟菌的分子生物学特征分析 黄亮 赵丽萍 张治芳 马艳霞 郭瑞玲 郭娜娜 邓建 摘要：目的 。 方法 结果 6例流脑疑似病人的脑脊液标本中检出份Nm CrgA基因阳性，份含有Nm C群siaDC)基因片段；血液标本中检出份Nm CrgA基因阳性，份含有Nm C群siaDC)基因片段。ST 分型为ST-4821complex。 结论 结果显示高致病性的ST-4821脑膜炎奈瑟菌已存在在邯郸市的健康人群中。 PCR；脑膜炎奈瑟菌；多位点序列分析 Biological Characteristics of 6 Strains of Neisseria Meningitidis Group C in Handan city HUANG liang ZHAO li ping ZHANG zhi fang Abstract:To understand the biological characteristics of Neisseria meningitides Group C in Handan city. Methods The isolation and culture from patients ,and using PCR,on the separated strains by multilocus sequence typing. Results There Neisseria meningitidis Nm CrgA gene fragments were detected from 5 of the 6 cerebrospinal fluid samples，and Neisseria meningitidis Nm CrgA gene fragments were detected from 1 of 6 blood samples. One of only 1 cerebrospinal fluid specimens from Neisseria meningitidis, identified as group C Neisseria meningitis. Multilocus sequence analysis results is ST-4821complex. Conclusion The results show that the highly pathogenic ST-4821 Neisseria meningitidis has existed in healthy crowd of Handan city. Key words PCR; Neisseria meningitidis; multilocus sequence typing 流行性脑脊髓膜炎（epidemic cerebrospinal meningitis）简称流脑由脑膜炎菌Neisseria meningitidis，Nm）引起的化脓性脑膜炎致病菌由鼻咽部侵入血循环，形成败血症最后局限于脑膜及脊髓膜，形成化脓性脑脊髓膜病变。, 脑膜炎奈瑟菌分为13 个血清群, 其中95% 的病例是由A、B、C、Y 和W135 血清群菌株引起的[1]。 目前，脑膜炎奈瑟菌（Neisseria meningitidis，Nm）分型方法主要有传统的血清学分型法和分子生物学分型法。由于抗生素的大量使用使得Nm发生变异，使得Nm无法进行血清学分型，由于这些变异，使得血清学分型法更难以反映某些遗传性的变化，因此，对菌株进行基因水平分析显得更加重要[2]。本研究采用多位点序列分析（Multilocus Sequence Typing，MLST）技术，结合PCR技术对邯郸市2012年Nm分离株进行分子流行病学研究，进而确定其序列型别（Squence Type,ST）PCR引物参照中国疾病预防控制中心（中国CDC）扩增Nm 所用的引物，由江苏硕世生物公司提供；巧克力双抗平板购自北京友康基业生物科技有限公司；生化反应条购自法国梅里埃公司；Nm 诊断血清购自美国REMEL公司。核酸提取试剂盒购自Qiagen公司。Taq酶、2×PCR Buffer、Marker D、6×Loading Buffer 均选自上海生工有限公司。 3、菌株的分离培养与鉴定：将患者及其密切接触者的血液培养液转种于新鲜巧克力平板上，CO2培养箱培养18h-24h，从中挑取可疑菌落进行染色镜检。生化鉴定采用梅里埃NH试纸条 [3][4] 。 4、PCR检测Nm种属： 对生化反应符合脑膜炎奈瑟菌的菌落溶于100μl的DNA提取液中，充分打散，沸水浴10min，13000rpm离心15min，上清液留作PCR反应模板，通过PCR扩增进行确认其种属类别。实验所用的引物序列见表