第十章 免疫系统及其功能的分析技术PPT.ppt

第十章 免疫系统及其功能的分析技术;免疫系统及其功能的分析技术;免疫系统及其功能的分析技术;第一节 免疫细胞的分离与保存;第一节 免疫细胞的分离与保存;1. 细胞密度差异 2. 细胞粘附及吞噬差异 表面标志分子 对低渗的敏感性 特异性促生长因子 正选分离与负选分离;1. 细胞密度差异;1. 细胞密度差异 2. 细胞粘附及吞噬差异 表面标志分子 对低渗的敏感性 特异性促生长因子 正选分离与负选分离; 细胞粘附差异分离方法; 细胞粘附差异分离方法;细胞吞噬能力差异分离技术;1. 细胞密度差异 2. 细胞粘附及吞噬差异 表面标志分子 对低渗的敏感性 特异性促生长因子 正选分离与负选分离;3. 表面标志分子;（1）E-玫瑰花环沉降法 （E rosette sedimentation）;（2）亲和淘洗法 （Biopanning）; 在补体的作用下裂解与抗体结合的细胞，从而分离出不能与此抗体结合的细胞亚群。这是一种负选性分离法，简称细胞毒法。 ;（4）荧光激活细胞分离法;方法快速、特异、高效，分离效果可与FACS法媲美，对仪器的要求却低得多。;1. 细胞密度差异 2. 细胞粘附及吞噬差异 表面标志分子 对低渗的敏感性 特异性促生长因子 正选分离与负选分离;4. 对低渗的敏感性;1. 细胞密度差异 2. 细胞粘附及吞噬差异 表面标志分子 对低渗的敏感性 特异性促生长因子 正选分离与负选分离;5. 特异性促生长因子;1. 细胞密度差异 2. 细胞粘附及吞噬差异 表面标志分子 对低渗的敏感性 特异性促生长因子 正选分离与负选分离;6. 正选分离与负选分离;第一节 免疫细胞的分离与保存;二、各类免疫细胞的分离;4. NK细胞和LAK前体细胞的分离 Percoll密度梯度离心法分离 单核细胞去除法: 粘附法 B淋巴细胞去除法: 尼仑棉纤维 T淋巴细胞去除法: E-玫瑰花环沉降法 5. 单核/巨噬细胞的分离 Percoll密度梯度离心 粘附法纯化单核/巨噬细胞;二、各类免疫细胞的分离;免疫系统及其功能的分析技术;第二节 免疫细胞及其功能测定;第二节 免疫细胞及其功能测定;一、免疫细胞表面标志和亚群测定;1. 免疫荧光法;4. 补体依赖的微量细胞毒试验;6. MHC-肽四聚体技术;第二节 免疫细胞及其功能测定;二、淋巴细胞增殖试验;1. 3H-TdR掺入法 （3H-TdR incorporation assay）;第二节 免疫细胞及其功能测定;三、细胞介导的细胞毒试验;51Cr释放法 （51Cr release assay）;Annexin V/PI;第二节 免疫细胞及其功能测定;四、活性分子分泌功能的测定;4. 肥大细胞脱颗粒试验 （Mast cell degranulation test）;第二节 免疫细胞及其功能测定;五、吞噬细胞功能测定;细胞吞噬细菌试验;细胞吞噬功能检测;细胞趋化功能检测;第二节 免疫细胞及其功能测定;六、抗原递呈功能检测;免疫系统及其功能的分析技术;第三节 免疫分子测定;第三节 免疫分子测定; 生物活性检测技术： 细胞因子依赖细胞株增殖试验 细胞因子功能检测 细胞因子功能中和抑制试验 免疫学检测技术： ELISA RIA 分子生物学检测技术： 分子杂交 PCR 单细胞产生细胞因子的测定技术： ELISPOT; 干扰素活性检测 采用水疱性口炎病毒（VSV）、鼠脑心肌炎病毒（EMCV）等病毒感染Wish、Hep-2、L929等细胞株 肿瘤坏死因子功能测定 采用L929、WEHI164.13等细胞株 趋化性细胞因子活性检测 采用外周血粒细胞或单核细胞;ELISAPOT检测特异性淋巴细胞及细胞因子分泌;第三节 免疫分子测定;二、细胞因子受体检测技术;第三节 免疫分子测定;三、抗体和补体的检测;免疫系统及其功能的分析技术;第四节 机体免疫功能研究和测定