第十四章 基因工程及其在医学中的应用PPT.ppt

同学们上午好;上节课的重点内容; 是指利用重组DNA技术将目的基因和载体重组，再导入受体细胞内进行扩增和表达的过程。 ;重组DNA技术中常用的工具酶; 限制性内切酶;EcoRⅠ;（二） 载体;质粒 (plasmid);特点： 多克隆位点 筛选标记;三 、基因工程的操作过程; 以 质 粒 为 载 体 的 DNA 克 隆 过 程;（一）目的基因的获得;组织或细胞染色体DNA;mRNA ;基因组DNA文库;粘性末端连接 ;Bam HⅠ切割反应;2. 平端连接 适用于：限制性内切酶切割产生的平端 粘端补齐或切平形成的平端;导入种类;Bam HⅠ切割反应;（四） 基因工程菌的筛选;(插入失活法) 抗药性标记选择;重组DNA技术操作过程可形象归纳为 ;重组DNA技术操作的主要步骤;（五） 外源基因的表达; 分子杂交以DNA的变性和复性为理论基础。 DNA变性：DNA在某些理化因素的作用下碱基对间氢键破坏，由双链变成单链的过程。 DNA的复性：变性DNA的单链重新合成双链的过程。 分子杂交：不同来源的单链核酸通过碱基互补形成杂合双链的过程。 ;复性;（一） 核酸探针（probe） ;（二 ）分子杂交的方法;;（三）印迹技术的类别及应用;分子杂交实验; 二、聚合酶链反应 (polymerase chain reaction, PCR) ;PCR的基本反应步骤;95?C;PCR的主要用途;三、DNA的序列分析; ;（二）DNA链末端合成终止法;四、转基因动物、克隆动物 和基因剔除技术 　　　　　　　　　　　;;;（二）克隆动物 ;多利诞生过程; （三） 基因剔除技术;定义：是指利用分子生物学和分子遗传学的技术方 法通过直接检测基因结构是否改变、基因表 达有否异常，对疾病作出诊断。 ;甲型血友病基因组的限制性酶切分析;; 基因治疗的概念;1.掌握基因工程和限制性内切酶的概念； 2.掌握限制性内切酶的识别序列的特点。 3.掌握转化、转染和转导的区别； 4.掌握重组DNA技术的大致操作过程； 5.掌握分子杂交、基因诊断和基因治疗的概念； 6. 掌握PCR的原理和步骤。