第三章 基因克隆的载体PPT.ppt

基因工程;《基因工程原理》;第三章 基因克隆的载体;引 言;Characteristics of vectors for gene cloning;第一节 质粒载体 （plasimid vectors）;1.质粒的生物学特性;1.质粒的生物学特性;1.质粒的生物学特性;1.质粒的生物学特性;质粒空间构型与电泳速率;1.质粒的生物学特性;天然质粒的局限性;第一节 质粒载体 （plasimid vectors）;质粒载体：作为基因工程载体，质粒至少应该具备复制的起始区、选择标记基因区、多克隆位点等部分。;多克隆位点：克隆载体中的一段用于插入外源DNA片段的特定区域，由一系列的紧密相连的限制性内切酶位点组成，而且每个限制性内切酶位点应该在整个载体中是唯一的。;;pSP2124质粒的Ampr基因;;pBR322的优点;外源基因?BamH I;氯霉素扩增之后，每个细胞可达1000~3000copy;保留了转移蛋白（mob）的作用位点。;① 删除mob识别位点;pBR325：;;① 复制起点;; ?-互补 (alpha-complementation) 大肠杆菌?-半乳糖苷酶 可以和其底物X-Gal 相互作用并且释放出一种蓝色物质，当该酶的?-片段和?-片段分开时就失去了这种显色的功能。通常将编码该酶?-片段的LacZ 基因插入到载体的多克隆位点的侧翼序列中，而在一些人工构建的大肠杆菌株系中却只能编码产生该酶的?片段。这样一来，含有功能性完整的LacZ 基因的载体导入到这类寄主细胞中时，载体编码的 ?-片段就能和寄主编码的?片段发生互补并具有了对底物X-gal的作用功能（发生显色反应），这种现象被成为是 alpha-complementation.;;;;（3）pGEM-3Z;表达型质粒载体;复制起始点ORI、 选择标记、 多克隆位点MCS;;;;第三章 基因克隆的载体;第二节 噬菌体载体 （phage vectors）;1. ?噬菌体的生物学特性;1. ?噬菌体的生物学特性;1. ?噬菌体的生物学特性;1. ?噬菌体的生物学特性;l 噬菌体生物学特性： 溶原状态;1. ?噬菌体的生物学特性;l 噬菌体生物学特性： 生物结构;;第二节 噬菌体载体 （phage vectors）;l-DNA载体的构建：缩短长度;l-DNA载体的构建：缩短长度 插入型载体;l-DNA载体的构建：缩短长度 取代型载体;l-DNA载体的构建：删除重复的酶切位点;l-DNA载体的构建：加装选择标记;l-DNA载体的构建：加装选择标记 imm434;l-DNA载体的构建：加??选择标记 lacZ;l-DNA载体的主要类型：;l-DNA重组分子的体外包装：;l-DNA及其重组分子的分离纯化：;l-DNA作为载体的优点：;第二节 噬菌体载体 （phage vectors）;3. M13噬菌体的生物学特性; 正链和负链出现不对称性积累：当RF积累到100-200个拷贝后，噬菌体DNA编码的正链特异结合蛋白很快就阻止了负链的进一步生成，但以负链为模板的正链合成并未受到影响。大量游离的正链DNA很快参入到外壳蛋白中形成新了大量新的噬菌体颗粒。 新组装的噬菌体颗粒并不会发生溶菌现象，只是从寄主细胞中挤压出去。但噬菌体的大量繁殖也干扰了寄主细菌的正常生长，所以仍可产生模糊的噬菌斑。 在M13基因组中由一段507bp的基因间隔区，该区可以接受外源DNA的插入而不会影响到噬菌体的活力。这是该噬菌体能用于单链DNA载体的重要前提。;3. M13噬菌体的生物学特性;第二节 噬菌体载体 （phage vectors）;4. M13噬菌体载体;M13 DNA载体的特点：;第三章 基因克隆的载体;第三节 柯斯质粒载体（cosmid vectors）;第三节 柯斯质粒载体（cosmid vectors）;第三节 柯斯质粒载体（cosmid vectors）;第三节 柯斯质粒载体（cosmid vectors）;第三章 基因克隆的载体;第四节 人工染色体载体（B/Y/HAC）;人造染色体载体;人造染色体载体;人造染色体载体;人造染色体载体;小 结;第三章 基因克隆的载体