第三章 基因工程载体2PPT.pptVIP

载体(Vector);第一节 基因工程载体的 一般特性及种类;2. 基因工程载体的种类;1. 质粒载体;1.1 Basic properties of plasmid;1.5 构建质粒克隆载体的基本原则;1.5 构建质粒克隆载体的基本原则;lacZ vs lacZ’ 或lacZ α ;α-互补法筛选重组子;α-互补法筛选重组子;;;1.7质粒表达载体;2.1 ?噬菌体载体;;;;载体的插入位点;3.粘粒(Cosmid)载体;能像l-DNA那样进行体外包装，并高效转染受体细胞 能像质粒那样在受体细胞中自主复制 重组操作简便，筛选容易 装载量大（ 35-45kb ）且克隆片段具有一定的大小范围 不能体内包装，不裂解受体细胞 主要用于基因组文库的构建，适于做真核细胞大片段的克隆。 ;第三节 酵母基因克隆载体; 穿梭载体;第四节 真核生物基因克隆的载体  和人工染色体;（1）病毒载体系统：植物病毒作为植物遗传转化的载体系统是由植物病毒的侵染特性所决定的。以病毒作载体的表达系统为瞬时表达系统，其一般不能把外源基因整合到植物细胞基因组中。植物病毒的感染率很高，在较短时间内可获得较大的表达量。但因以病毒为载体的表达系统每个宿主材料都要接种病毒载体，故瞬时表达系统不易起始。作为病毒载体的病毒最好是双链DNA植物病毒 。;(2) 农杆菌质粒载体系统：质粒载体系统中最常用的质粒有：Ti质粒和Ri质粒。农杆菌质粒是一种能实现DNA转移和整合的天然系统。;Ti质粒作为载体的优点：;Ti质粒作为载体的缺点：;对Ti质粒的改造：;2. 动物细胞克隆载体 目前使用的动物细胞克隆载体主要有哺乳动物病毒载体和昆虫病毒载体 。;(1)哺乳动物病毒载体;(2)昆虫病毒载体 ;3. 人工染色体 ;人工染色体实际上是一种“穿梭”载体，含有质粒克隆载体所必备的第一受体（大肠杆菌）源质粒复制位点(ori)，还含有第二受体(如酵母菌)染色体DNA着丝点(centromere)、端粒（telesome）及复制起点等功能序列，另外还含有合适的选择标记基因。 在第一受体细胞内按质粒复制形式进行高拷贝复制；在体外与目的基因重组后，转化第二受体细胞，然后按染色体DNA复制的形式进行复制和传递。;人工染色体的应用： 构建基因组文库：覆盖率高 基因治疗 基因功能鉴定