工业微生物接种技术教程.pptVIP

穿刺接种方法： （1）消毒 （2）标记 （3）整理台面 （4）点燃酒精灯 （5）接种 1）手持试管 2）旋松棉塞 3）接种针灼烧灭菌，把在穿刺中可能伸入试管的其他部位也灼烧灭菌 4）拔出棉塞 5）取菌：用冷却接种针的针尖沾取少量菌种 6）穿刺：水平法和垂直法。 将接种针自培养基中心平稳、快速垂直刺入培养基， 至接近试管底部，然后沿接种线拔出 7）塞上棉塞 8）接种针灼烧灭菌 （1）划线接种 目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。 4.平板接种 分区划线法 第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环 ※适用于含菌量较多的标本 连续划线法 ※适用于含菌量较少的标本 稀释法：微生物分离、纯化 稀释倒平板法:菌悬液稀释—不同梯度的稀释液少许与培养基混合—摇匀—倒培养皿中 稀释混合平板法（倾注法）：稀释—培养皿中加入不同梯度的菌悬液1mL—加45℃左右的培养基—摇匀 稀释涂布平板法：倒平板----稀释----接种0.1mL—涂布 各种接种方法的用途 1.斜面接种法 用于鉴定和保存菌种。 2.液体培养基接种法 可观察细菌在培养基中的生长现象或用作生化反应实验 3.半固体培养基接种法 穿刺接种法，用于保存菌种或观察细菌动力 　4.平板划线接种法 目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。 方法： 分区划线法：适用于含菌量较多的标本。 连续划线法：适用于含菌量较少的标本。 5.涂布接种法：用于分离、测定标本中活菌数和药敏实验细菌接种 6.倾注培养法：用于活细菌计数。 是将需要的某种微生物从混杂的微生 物群体中分离出来，得到只含有一种 微生物的培养物。 是由一个单细胞或一种细胞群繁殖 得到的后代称纯培养。 菌种的分离 微生物的纯培养 三、菌种的分离方法 获得纯培养的方法： 平板划线分离法 1 2 单细胞挑取法 3 组织分离法 4 选择培养基分离 5 三、菌种的分离方法 稀释平板分离法 3、单细胞挑取法 用显微挑取器，从待分离材 料中挑取一个细胞来培养，从 而获得纯培养的方法。 毛细管法：用毛细管提取微生物个体，适于较大微生物 显微操作仪：用显微针、钩、环等挑取单个细胞或孢子 小液滴法：将经过适当稀释后的样品制成小液滴，在显微镜下选取只含一个细胞的液滴来进行纯培养物的分离。 4、组织分离法 分离步骤 ⑴制作培养基并对培养基灭菌。 ⑵对组织块进行消毒处理：在无菌条件 下，用无菌刀片切取小块受病组织，放 入0.1%的升汞水中浸泡2-3min，再用无 菌水冲洗数次。 是用感病的生物体组织来分离微生 物得到纯培养物的方法。 ⑶接种：把组织块分割成小块，放到平板培 养基表面。每个平皿中放入3-5个小组织块 ⑷培养:适温培养到组织块周围长出单菌落 ⑸转管纯化：将需要的单菌落转接到斜面试 管培养基上，经培养后得到纯培养物。 此种方法适合于病原微生物的分离。 5.选择培养分离法 使待分离微生物生长特征“突出”； 抑制大多数其它微生物的生长； 使待分离微生物生长更快。 微生物群落中数量占少数的微生物得到分离纯化： 颜色反应：分离特定的菌株 牛奶平板：分离蛋白酶产生菌 使待分离微生物生长特征“突出” 高温下培养：分离嗜热细菌 培养基中不含N：分离固氮菌 培养基加抗生素：分离抗性菌 抑制大多数其它微生物的生长 富集培养: 利用不同微生物间生命活动特点的不同，制定特定的环境条件，仅使待分离微生物旺盛生长，在群落中的数量大大增加，从而更容易地从自然界中分离到所需的特定微生物。 使待分离微生物生长更快。 几种分离方法的应用范围 划线：不需稀释，简便，用于分离 稀释混合平板法：分离、活菌计数 涂布平板法：分离，可得到比较多的单菌落，方便筛选。 单细胞挑取法：高度专业 选择培养：分离生理类型特殊的微生物 工业生产中培养的菌种接入种子罐时，一般先制成 菌悬液。 常用的接种方法有压差法、火焰封口法等。 1.火焰封口法 种子罐的接种口周围设有沟槽，接种时先在沟槽里 注入少量酒精，然后用火焰点燃酒精，使接种口被 包围在一堆火焰之中，接着将菌悬液倒入种子罐中 即可。 五、工业生产中的微生物接种 2 、压差法 先用棉花球蘸消毒剂覆盖在种子罐接种口的橡皮塞上，消毒5 ～ 10min ，将连接在盛有菌悬液的容器上的接种针头迅速插入接种口的橡皮小孔中，然后平衡种子罐与盛菌悬液的容器之间的压力，接着降低种子罐的压力，菌悬液就会注入到种子罐里。接种完后，再用消毒剂拭净接种口的小孔。 工业生产中的微生物接种 工业微生物的培养方法 项目二 微生物无菌操作及接种技术 无菌操作技术：指在微生物