猪圆环病毒2型ORF2与猪γ干扰素基因的重组腺病毒转移载体的构建.pdfVIP

第十三次学术研讨会会议论文集 本研究中所构建的八个真核表达质粒，转染PK．15细胞后，较短片段的六个真核表达质粒都产 · 生了明显的荧光，说明所构建的真核表达载体是能在真核细胞中进行表达的。在攻毒实验中，由PCR 诊断的结果和病理切片观察到，小鼠做为PCv-2攻毒实验动物的模型是可行的，免疫组小鼠抵抗 PCv-2感染明显优于阳性对照组小鼠，由此呵见质粒免疫在攻毒试验中有明显免疫保护效果，但这 些能否用于猪的临床试验，还需要进一步研究论证。 参考文献(略) 猪圆环病毒2型oRF2与猪丫-干扰素基因的重组腺病毒转移载体 的构建 刘根梅1陈瑞爱2韩静芳2罗满林1，2 (1．华南农业大学，广东广州，5106422．广东大华农动物保健品股份有限公司，广东新兴527400) 用于猪圆环病毒2型0RF2基因的扩增，另一对引物P3，P4则用于1，．IFN基因的扩增。再以所扩增的2段基因为模板， P1，P4为引物扩增融合基因0RF2．1r．IFN。将所扩增的串联基因连接PMD．18T-Simplevector，经PCR方法和限制性内 切酶分析鉴定该串联基因已成功转入重组质粒中(命为PMD．0RF2．Y．IFN)。腺病毒转移载体Pshuttle．CMV和 PMD．ORF2一Y．1FN经双酶切后再切胶回收并连接后，经PcR方法和限制性内切酶酶切法及测序证明两基因已成功连 和PacI酶切方法及测序鉴定表明该重组腺病毒载体已得到成功构建。 关键词 ORF2；猪Y．干扰素；转移栽体；重组腺病毒 猪圆环病毒(Porcine 小的动物病毒…，直径仅为17nm，基|大1组为单股负链环状DNA，无囊膜。根据PCV的致病性、 种组织及猪源细胞系中，对猪无致病性。PCV2具有致病性，主要引起断奶仔猪多系统衰弱综合症 (PostweallingmuItisystemicwasting 767或l768 和繁殖障碍悼1等疾患，已给全球养猪、Jk造成相当严雨的经济损失。PCV2基因全长为l bp 包含ORFl～ORFl l(u～36ku， 相关的蛋白(Rep蛋白)；ORF2大小为705bp，编码病毒的核衣壳蛋白(Cap蛋白)，分子量28 是病毒的主要结构蛋白，具有较强的免疫原性，是构建币组疫苗和临床检测的首选基凶。 干扰素吖(Inte疵ron NK细胞产生的一种细胞因子pJ，它能增强细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和NK细胞杀伤靶细胞的能力， 一步增强细胞免疫应答，具有明显的免疫调节活性Il们。Y干扰素本身不仅具有抗病毒活性，也具有 免疫佐剂的效应。而根据前人的研究，细胞闪子基因与保护性抗原基因融合表达通常具有协同作用， 发挥比单一抗原免疫更佳的防疫效果。目前，干扰素基凶工程和基因治疗研究引起了广泛关注，已被广 泛应用于动物疾病防控研究。 腺病掣11】作为基因表达载体的研究起源于20世纪60年代初，腺病毒载体的主要特点是能感染 非分裂的细胞；能有效进行增殖，滴度高；能同时表达多个基因，且具有宿主范围广，转导效率高， 表达时间长，易于浓缩和贮存等优点11¨引。故本研究以腺病毒为载体，选取PCV2．oRF2和丫．IFN oRF2吖一IFN，并构建重组腺病毒转移载体，该转移载体．与腺病毒骨 架在细菌内发生『司源重组，产生重组腺病毒载体，这为构建包含PCV2．ORF2基因与Y一吲基 因的重组腺病毒活载体疫苗打下了基础。 猪的传染病一猪圆环病毒病 1材料与方法 1．1质粒、菌株 E．coli菌株DH5 vector购自 0【由华南农业大学兽医学院传染病实验室保存，PMDl8一T-simple 为分别含有猪圆环病毒2型oRF2基凶和Y一干扰素基因的重组腺病毒转移载体，由陈钜豪硕士构建。 1．2试剂 限制性内切