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犬子宫蓄脓的细菌分离鉴定及 药敏试验研究 谢伟东’娄红军’黄克和2 (1、南京警犬研究所动物医院；2、南京农业大学) 子宫蓄脓是指子宫腔内积有脓液…。本病一年四季均可发病，无明显的季节性|”。。化 脓性子宫内膜炎及急、慢性子宫内膜炎，化脓性乳房炎可引起本病，其他部位化脓灶转移 亦为诱因之一…。 本试验利用B超的实时显像技术，通过腹腔穿刺子宫，采集临床确诊为犬子宫蓄脓的 子宫内容物50份，进行细菌的分离培养及生化鉴定，以确定子宫内容物中细菌的种类。 同时对分离出的细菌进行药物敏感性试验，筛选出细菌敏感性药物，为犬子宫蓄脓的临床 治疗提供参考。 1材料与方法 1．1主要仪器设备 DH一360型电热恒温培养箱，北京中兴伟业仪器有限公司生产 1．2培养基及生化试剂 营养琼脂、营养肉汤、血清肉汤、鲜血琼脂、麦康凯琼脂、M-H平板、血清M—H平板、 肠杆菌科细菌生化鉴定试剂盒、葡萄球菌属细菌生化鉴定试剂盒、非发酵细菌生化鉴定试 剂盒，均购于南京便诊生物科技有限公司 1．3药敏纸片 包括氨苄西林、庆大霉素、阿米卡星、头孢唑啉、头孢拉定、头孢曲松、头孢哌酮、 痢特灵、恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、四环素、氯霉素、磷霉素、强力霉素、阿奇霉 素、青霉素、红霉素和氧氟沙星，均购于南京便诊生物科技有限公司 1．4子宫蓄脓犬的确定 从2004—2008年某动物医院就诊犬中，选择临床症状出现腹围增大、阴户肿胀或阴门 流脓，经B超腹部探查，子宫内出现液性暗区的犬50头，确定为子宫蓄脓犬。 1．5子宫脓液的采集 病犬仰卧保定，腹部剃毛，涂布耦合剂。B超探头置腹部，沿腹中线做滑行和扇形扫 查，探查到子宫内液性暗区紧贴腹壁区域后固定探头方向，如无法探查到此区域，则按压 犬两侧腹壁或变更犬体位，使子宫液性暗区紧贴腹壁。取2m1一次性注射器于B超探头一侧 沿探头平面斜刺入腹壁，’当B超声像图显示注射器针头进入子宫液性暗区后，停止刺入， 吸取子宫内容物0．5ml，并立即进行细菌分离培养。 243 1．6细菌分离鉴定 将采集的子宫内容物用划线法接种于营养琼脂及血琼脂中，置恒温箱37℃培养24—48 小时，观察细菌的生长情况。如为混合菌落，则挑取不同茵落接种于培养基进行纯培养。 获得单一茵落后，革兰氏染色镜检，并根据细菌特征做鉴别培养及生化鉴定试验。 细菌为革兰氏阴性杆菌，营养琼脂上呈现乳白色、圆形、，隆起的中等大小菌落、血琼 脂上菌落灰白色、圆形隆起、湿润、不溶血，则转接种于麦康凯培养基，37℃培养24h 后，如长出粉红色中等大小菌落，则挑取菌落按常规法做氧化酶及葡萄糖发酵试验，如为 氧化酶阴性，发酵葡萄糖，则按肠杆菌科细菌接种于肠杆菌科细菌生化鉴定试剂盒，37℃ 培养24h。根据反应结果，查表确定细菌类型。 如为革兰氏阴性杆菌，氧化酶试验阳性，葡萄糖发酵试验阴性，则接种于非发酵革兰 氏阴性杆菌生化鉴定试剂盒，37℃培养24h。根据反应结果，查表确定细菌类型。 如镜检为革兰氏阳性球菌．按常规方法做触酶试验。触酶试验阳性者，加做葡萄糖发 酵试验，如为阳性，则按葡萄球菌属接种于葡萄球菌属细菌生化鉴定试剂盒。根据反应结 果，查表确定细菌类型。 如镜检为革兰氏阳性球菌，触酶试验阴性，按链球菌鉴定方法做进一步做甘露醇、葡 萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、淀粉、七叶营、山梨醇、蕈糖、血清菊糖发酵试验，精氨酸、 马尿酸盐、明胶水解试验，胆汁溶菌试验。根据反应结果，确定细菌类型。 1．8细菌药敏试验 按照纸片扩散法对所有分离株进行抗茵药物的敏感性试验。药物纸片包括氨苄西林、 庆大霉素、阿米卡星、头孢唑啉、头孢拉定、头孢曲松、头孢哌酮、痢特灵、恩诺沙星、 诺氟沙星、环丙沙星、四环素、氯霉素、磷霉素、强力霉素、阿奇霉素、青霉素、红霉素 和氧氟沙星，共19种。不同种属根据‘抗菌药物敏感性试验的执行标准：}推荐抗菌药物， 并结合临床抗菌药物使用情况，选取不同的药敏纸片集。 操作方法：将分离出的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌及铜绿假单胞菌接种于营养肉 拭子沾取茵液，在管壁上挤压后，均匀涂布于M-H平板表面(溶血性链球菌接种于M州血清