犬抗坏血酸克吕沃尔氏杆菌分离鉴定及药敏试验分析.pdfVIP

犬抗坏血酸克吕沃尔氏杆菌分离鉴定及 药敏试验分析 邬向东1 陈如圣2 全炳昭1 于利兵1雷海芳2戴茶股2徐勤伦2 (1：江西农业大学动科院南昌330045；2：江西农业大学兽医院南昌330044) 摘要：本文针对一例病程长，以阵发性干咳，眼、鼻腔有脓性分泌物为主要的临床表现 的病例进行研究。无菌操作采集此病犬鼻腔脓性分泌物进行了细菌分离、培养、涂片染色 镜检、生化鉴定，以及药物敏感试验。结果初步鉴定该菌为抗坏血酸克吕沃尔氏杆菌。该 菌对青霉素G、万古霉素、多黏菌素B、新生霉素等耐药，对庆大霉素、链霉索等药物呈中度 敏感，对诺氟沙星、头孢曲松、痢特灵、氨苄西林、头孢噻肟钠均高度敏感。临床上以头孢噻 肟钠为主进行综合治疗，效果明显。 关键词：抗坏血酸克吕沃尔氏杆菌，鉴定；分析。 该属细菌称为肠道菌群8，后定为克吕沃尔氏菌属。该属细菌在分类学上经历了长期和复 统生化鉴定和分子遗传学检测后，确立克吕沃尔氏菌属。抗坏血酸克吕尔氏杆菌是一种小 的杆菌，大小0．5—0．7×2—3mm。有稀的周生鞭毛能运动，营养类型为兼性厌氧菌。外界 环境中可存在于食物、土壤和污水中。在动物体内可以在呼吸道、尿道、粪便中存在，而血 液中罕见。是一种不常见的条件性致病菌。正常情况下，抗坏血酸克吕沃尔氏杆菌可在动 物体内正常存在，与动物机体，环境之间处于协调状态，维持着一定的生态平衡。如果宿主 患病、外科手术、环境改变和滥用抗菌药物等，宿主机体的正常菌群中的微生物种类、数量 和栖居处将会发生改变，从而导致这种条件性致病菌大量增殖，因此出现临床症状[1]。 2007年7月中旬，南昌市一宠物主带一只三月龄的雪橇犬到江西农大兽医院宠物诊疗 室诊治，当时其以干咳、眼流泪、鼻流脓性分泌物、体温升高至40。C左右为主要症状。经我 院精心治疗一段时间后，主人可能见犬稍有好转便未进行复诊，可没隔一周，此犬病情加 重，治疗两天后又不遵医嘱，反复多次，此犬病情越来越严重，至8月中旬，我们采集了此犬 的鼻腔脓性分泌物做病原检查，结果证实为犬抗坏血酸克吕沃尔氏杆菌感染，现报道如下： 1、材料与方法 1．1实验材料 1．1．1病料：鼻腔的脓性分泌物，为2007年8月江西农大兽医院宠物诊疗室收治的一 197 只三月龄雄性雪橇犬，犬体重约2kg，犬主为南昌市夏家熊先生。 1．1．2主要培养基：巧克力琼脂培养基、伊红美兰琼脂培养基(EMB)、普通肉汤培养基 (均参考文献[2]配制)。 1．1．3主要试剂微量生化反应管、药敏纸片等购自杭州天和微生物试剂有限公司。 1．2、实验方法 1．2．I细菌分离无菌棉拭子采集患犬两坝4鼻腔内的脓性分泌物，用巧克力琼脂培养基 37。C分离培养。可疑菌落革兰氏染色镜检、纯化，转接普通琼脂和EMB，观察在不同培养基 上细菌的生长特性。 1．2．2生化鉴定取上述分离菌株的纯培养物，分别接种于各种微量生化反应管。37。C 恒温培养，按常规方法进行反应结果判定。 1．2．3药敏实验，纸片扩散法，参考文献【3]进行，稍有改动。 用接种环挑取已分离纯化的相同菌落4—5个接种于普通肉汤培养基中，37℃培养16 —18h，调整细菌浓度到麦氏比浊管1／2，即菌数为1．5×108／mL，备用。 用灭菌的棉拭子蘸取菌液，在管壁上旋转挤压几次，去掉多余的菌液。然后用拭子涂 布整个普通培养基表面，反复几次，每次将平板旋转60度，最后沿平板周边绕两圈。 待平板上的水分被琼脂完全吸收之后，在平皿后方做标注，然后用无菌镊子将各种抗 菌药物圆纸片分别对号贴于培养基表面。37℃恒温培养24h，取出平板测量抑菌圈的直径。 结果按抑菌圈直径大小和各抗菌药物的具体标准[4]、[5]，可评定为高敏、中介和耐 药。 2．结果 2．1培养及染色结果 将病料接种到巧克力琼脂培养基上，37℃培养24小时。可见中等大直径约为2— 4mm，圆形，半透明，灰白色，表面光滑致密型菌落。涂片经革兰氏染色镜检为两极染色的革 兰氏阴性球杆菌。取纯培养后的典型菌落继续培养，在伊红美蓝琼脂培养基上可形成透 明、无色、光滑、边缘整齐隆起的中等大小菌落，室温放置数日，菌落变大，形成菌苔。在巧 克力琼脂培养基上生长良好，菌落乳白色、半透明、光滑、微隆起、中等大。在普