超高效液相色谱泊联质谱法同时检测干果中16种真菌毒素.docVIP

超高效液相色谱泊联质谱法同时检测干果中16种真菌毒素 　　摘 要 建立了同时检测10种常见干果中16种真菌毒素的超高效液相色谱串联质谱方法。将干果可食部分加水匀浆，以10 mmol/L柠檬酸乙腈溶液为提取剂，C18为净化剂，使用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱分离样品，在优化的洗脱梯度和时间条件下，16种真菌毒素在8 min内实现良好分离，检出限为0.02～1.00 μg/L； 在线性范围 （1～200 μg/L） 内线性相关系数R0.9981，3个添加水平的平均回收率为70.48%～118.85%，相对标准偏差 （RSD） 为0.3%～11.9%。本方法经济、快速、简单、高效，能够满足不同干果基质中多种真菌毒素同时检测要求。 　　1 引 言 　　我国是干果第一生产大国，主产干果有核桃 （Walnut）、板栗 （Chinese chestnut）、榛子 （Hazelnut）、松子 （Pine nut）、杏仁 （Almond）、无花果干 （Dried fig）、桂圆干 （Dried longan）、红枣 （Chinese jujube）、葡萄干 （Raisin） 、柿饼 （Dried persimmon） 等。干果对人体生长发育、增强体质、预防疾病有极好的功效[1，2]。干果生长成熟期（果壳裂开）、采后处理（去壳、清洗等）及储藏过程中可能被产毒真菌侵染[3]。据欧盟食品和饲料快速预警体系 （The Rapid Alert System for Food and Feed， RASFF）的通报数据显示，2008～2014年，在被通报的26种食品安全风险因素中，真菌毒素通报数量始终在前三位，而坚果及其制品和种子类是被通报次数最多的食品种类[4，5]。在干果中检出的真菌毒素主要有黄曲霉毒素 （Aflatoxin， AFB1、AFB2、AFG1、AFG2）[6～8]、恩镰孢菌素 （Enniatine， ENA、ENA1、ENB、ENB1）[8]、白僵菌素 （Beauvericin， BEA）[8]、交链孢酚 （Alternariol， AOH）[8]、交链孢酚单甲醚（Alternariolmonomethyl ether， AME）[7]、腾毒素（Tentoxin， TEN）[8]、赭曲霉素（Ochratoxin， OTA、OTB）[8～11]、玉米赤霉烯酮（Zearalenone， ZEA）[10～12]、T2毒素[12，13]等16种。我国食品中真菌毒素限量标准（GB2761 2017）对4种毒素（AFB1、OTA、T2和ZEA）作出了限量标准，但只有AFB1的限量标准的适用范围包括干果产品，标准规定熟制坚果及籽类中AFB1含量低于5 μg/kg，杏仁、榛子中低于15 μg/kg[14，15]。 　　多种真菌毒素同时检测方法包括样品前处理和仪器分析两大步，其中以快速（Quick）、简单（Easy）、经济（Cheap）、高效（Effective）、稳定（Rugged）、安全（Safe）得名的QuEChERS前处理方法，具有仪器设备简单、处理步骤少、可实现多组分同时净化等优点，广泛用于真菌毒素检测[16，17]。本研究选择该样品前处理方法处理样品。常用的仪器分析方法有气相色谱（Gas chromatography， GC）[18]，液相色谱（Liquid chromatography， LC）[19，20]以及气相色谱串联质谱 （GCMS）[21]和液相色谱串联质谱法 （LCMS）[22，23]等，其中超高效液相色谱串联质谱（Ultra high performance liquid chromatographytandem mass spectrometry， UPLCMS/MS）能满足多组分、高通量、快速定性和定量分析。 　　如今食品安全备受关注，而相关研究报道涵盖的干果基质和真菌毒素种类不全面，主要集中在核桃[6，9，12]、无花果干[9，12]、杏仁[10，11]中的黄曲霉毒素[6，9，11，12]、赭曲霉毒素[11～13]。如白春林等[6]对湖北省市售坚果及籽类中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2进行了检测分析，Trucksess等[9]对葡萄干、无花果中的AFB1、OTA进行了检测分析。现有的多?N真菌毒素检测方法适用的基质一般为1～ 5种[10，11]，液相梯度洗脱时间在8 min以上[7，10，13]，如文献[13]和[29]中建立的检测方法分别在10 min内实现10种毒素和11种毒素的同时检测。本研究以我国主产的10种干果为基质，通过对比4种提取剂的提取效果。选择并优化净化剂用量和液相梯度洗脱条件，建立了干果中16种真菌毒素同时检测的超高效液相色谱串联质谱方法。 　　2 实验部分 　　2