UPLC-PDA-TOFMS法测定柴胡中柴胡皂苷a定性定量分析.docVIP

精品论文 参考文献 UPLC-PDA-TOFMS法测定柴胡中柴胡皂苷a定性定量分析 董传健 （连云港润众制药有限公司 222006） 【摘要】目的 对柴胡中柴胡皂苷a进行定性和定量分析。方法　本文实验采用超高效液相色谱-光电二极管阵列-飞行时间质谱仪联用技术的新方法进行。采用 Waters Acquity UPLC 系统，使用ACQUITYUPLCBEHC18(50mmtimes;2.1mm，1.7mu;m)色谱柱，流动相为乙腈-水，梯度洗脱。质谱条件为电喷雾电离源（ESI）,正离子监测。结果　柴胡样品的色谱图谱峰与柴胡皂苷a的谱峰一致，确证了其存在性；通过色谱峰保留信息、PDA数据及一级、二级质谱数据对柴胡中柴胡皂苷a的含量测定计算。结论　采用新方法实现柴胡皂苷a成分的在线分离分析检测，并对其进行定性定量测试中取得了较好的效果，实现了对柴胡中柴胡皂苷a进行定性和定量分析。 【关键词】药物分析 UPLC-PDA-TOFMS 柴胡皂苷a 定性定量分析 【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）01-0032-02 柴胡为伞形科(Umbelliferae)中的柴胡属(Bupleurum L.)植物干燥的根，一种中草药，能够解热镇痛且利胆保肝。中医用药中柴胡可以实现和解退热以及疏肝解郁和升阳举气[1]。其主要的活性成分为柴胡皂苷类，其次为柴胡挥发油。科学家[2]已经从小叶的黑柴胡中分离出了5 个皂苷以及2个皂苷元。本文通过实施建立超高效的液相色谱(UPLC) 来测定小叶黑柴胡中柴胡皂苷 a、d的含量并对小叶黑柴胡的质量实施控制。UPLC法柱效、灵敏度均较高，其分析时间被大大的缩短。采用超高效液相色谱-质谱联用的方法，能够进一步对柴胡中的柴胡皂苷a进行有效分析，来测定柴胡皂苷a的有效含量[3-4]。 1 仪器与试药 1.1 仪器 色谱仪是由美国Waters公司提供的ACQUITY Ultra Performance LC 超高效液相色谱仪，其具备高压二元梯度泵以及控温自动进样器和二极管阵列检测器其同时拥有Empower2色谱工作站。飞行时间质谱仪同时配备相应的电喷雾离子源(ESI 源)和G1969ATOF /MS,Agilent色谱数据工作站以及Ana]ystQS。所需电子分析天平是AL204型电子分析天平其由梅特勒-托利多有限公司上海分公司生产。提取器的由北京金鼐科技发展有限公司生产的JHBE －20A 型闪式提取器。 1.2 药品试剂 柴胡，由上海华宇药业有限公司提供的，经严格鉴定其为伞形科植物-北柴胡Bupleurum chinense DC。柴胡皂苷a对照品则是由中国药品生物制品鉴定所提供，其生产批号为：110777-200303。试剂为甲醇、乙腈其均为色谱纯，水为自制的双蒸水。 2 方法 2.1 分析条件 色谱条件 ACQUITY UPLCTMBEHC18柱 (2.1 mmtimes;100 mm，1.7mu;m) ; 流动相乙腈(A) -2mmol?L－1醋酸铵溶液(B)。梯度洗脱条件如下表 表一：梯度洗脱条件 流速 0.2 mL?min－1; 柱温 35 ℃; 样品室温度 4 ℃; 进样量 10 mu;L。 2.2 质谱条件 电喷雾离子源(ESI)；正、负离子同时检测; 全扫描(MS scan)，扫描范围 m/z 100 ～1000; 毛细管电压 3.0 kV(ESI+) ，2.8 kV(ESI－) ;锥孔电压 25V; 源温 120℃; 去溶剂气温度 450℃;去溶剂气流速 500L?h－1; 锥孔气流速 30 L?h－1。 2.3 样品制备 对照品溶液: 精密称取适量对照品柴胡皂苷a，用甲醇进行溶解将其配制成0.504mg/mL的标准溶液，将其做为对照品贮备液。同时精密的量取其2mL置于10mL的量瓶中，定容并摇匀得到对照品溶液。 供试品溶液：称取柴胡2g（过20目筛），加入5%的氨水-甲醇混合液，进行3次的回流提取，每次时间为2min。将滤液进行合并并浓缩至10mL，得到柴胡的单煎液。精密的吸取所得单煎液1.0mL置于25mL的量瓶中，用甲醇溶液进行标准定容，在采用0.22mu;m 滤膜进行过滤，得到续滤液，即所需供试品溶液。 2.4 测定波长的选择 精密量取1mL的对照品储备液，将其置于10mL的量瓶中，加