ⅰ型1，4，5-三磷酸肌醇受体在糖尿病肾病大鼠肾脏中的表达及替米沙坦干预后的变化.docVIP

精品论文 参考文献 Ⅰ型1，4，5-三磷酸肌醇受体在糖尿病肾病大鼠肾脏中的表达及替米沙坦干预后的变化 安阳市儿童医院 河南安阳 455000 摘要：目的 研究糖尿病肾病大鼠肾脏Ⅰ型1，4，5-三磷酸肌醇受体（IP3R）表达的变化以及AngⅡ受体拮抗剂（ARB）干预后的变化。方法 采用链尿佐菌素腹腔注射制备糖尿病肾病大鼠模型。动物随机分为三组，即正常对照组、糖尿病肾病组和替米沙坦治疗组。8周后分批处死大鼠，应用免疫组织化学、RT-PCR技术检测糖尿病肾病大鼠发病过程中，大鼠肾脏IP3R蛋白质的定位、表达及mRNA表达的变化以及ARB（替米沙坦）干预后的变化。结果 Ⅰ型IP3R主要分布于肾小球系膜细胞和血管平滑肌细胞的胞浆内。在糖尿病肾病大鼠模型中Ⅰ型IP3R表达增强，ARB干预后Ⅰ型IP3R表达减轻，对照组和实验组对照有统计学意义。结论 在糖尿病肾病发病过程中，肾脏Ⅰ型1，4，5-三磷酸肌醇受体表达增强，其mRNA也呈上调趋势，采用ARB干预后可以减少Ⅰ型IP3R在肾脏表达，改变肾脏对缩血管物质的敏感性，达到优化RAS治疗，可预防糖尿病微量白蛋白尿的发生、进展及糖尿病肾病最终发展为终末肾脏疾病。 关键词：大鼠；糖尿病肾病；受体；1，4，5-三磷酸肌醇；替米沙坦 前言 糖尿病肾病（DKD）是糖尿病的主要并发症，细胞内游离钙浓度的变化是维持细胞生理功能的重要基础，是钙离子跨膜转运和细胞内钙库释放、摄取钙离子等动态平衡的结果。细胞内存在的钙释放通道有两种，1.4.5- 三磷酸肌醇受体和兰尼定受体，前者是配体门控钙离子释放通道蛋白，1，4，5-三磷酸肌醇配体与其结合后，自身内部钙离子通道开放，致钙库释放钙离子，诱导及调控信号，从而发挥多种重要物学效应。 大量循证医学证据表明RAS阻断剂如AngⅡ受体拮抗剂（ARB）可预防糖尿病微量白蛋白尿的发生、进展及DN最终发展为终末肾脏疾病。研究发现，AngⅡ等缩血管活性物质可刺激细胞内第二信使1，4，5-三磷酸肌醇（IP3）的产生，IP3与三磷酸肌醇受体（IP3R）结合发生构象改变，进而促进细胞内钙释放和细胞外钙内流。本文旨在探讨糖尿病肾病时肾脏Ⅰ型1，4，5-三磷酸肌醇受体表达的变化，探讨Ⅰ型IP3R在糖尿病肾病肾血管收缩机制中的作用以及ARB干预调节肾脏Ⅰ型IP3R的表达，改变肾脏对缩血管物质的敏感性，达到优化RAS治疗的目的。 1 材料与方法： 1.1材料 健康雄性清洁级SD大鼠30只，6—8周龄，重量200—250g（由郑州大学实验动物中心提供）。链脲佐菌素（STZ）（美国Sigma公司）；Ⅰ型IP3R抗体（组化用，美国Santa Cruz公司）；免疫组织化学试剂盒（北京中山生物技术有限公司）；RT-PCR试剂盒（日本TaKaRa公司）。 1.2 方法 1.2.1 动物模型：健康雄性清洁级SD大鼠30只，6—8周龄，重量200—250g，随机分为3组，即正常对照组（C，n =10）、糖尿病肾病组（D，n =10）和替米沙坦治疗组（T，n =10），在禁食12h后，D组和T组的大鼠采用链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）以新鲜配制的枸橼酸缓冲液（0.1 molmiddot;L-1、pH为4.6）稀释成1%溶液，按60mgmiddot;kg-1体重单侧腹腔一次性注射；对照组的大鼠腹腔注射等容积的柠檬酸缓冲液。在注射STZ后第3d用快速血糖仪测定血糖，血糖ge;16.65mmolmiddot;L-1，各组大鼠自由进食饮水，实验中不予任何降血糖药物。大鼠饮水量、尿量明显增加，体重下降，消瘦，精神差，实验各观测点上，糖尿病组血糖值已经全部超过16.65mmol/L，糖尿病模型复制成功。普通饮食继续喂养3周，用代谢笼收集24h尿液，用磺基水杨酸法，并行空白对照测定24h尿蛋白排泄量，尿蛋白＞30㎎/24h即糖尿病肾病模型成立［1.2］。糖尿病肾病（DKD）模型成立后，T组给予替米沙坦混悬液按40mgmiddot;kg-1middot;d-1一次性灌胃，C组和D组给予同等体积蒸馏水灌胃。 1.2.2 样品收集：各组分别于第8周末，检测大鼠血糖、体重，用代谢笼留取24 h尿标本，测尿量，测定24小时尿蛋白总量。并在上述时间点，采用3%水合氯醛麻醉，经内眦静脉取血，检测肌酐、血脂、血浆白蛋白。同时第8周末各组分别处死30只大鼠。 1.2.3 免疫组化检测：大鼠肾脏经10%福尔马林多聚甲醛中固定后，按梯度酒精脱水，石蜡包埋，切片。按照免疫组织化学试剂盒说明操作。免疫组化结果判断：细胞胞质内棕褐色颗粒为阳性细胞．在高倍镜下选择有代表性视野计数1000个肾皮质细胞中的阳性细胞数． 1.2.4 RT-