鸽源禽流感病毒H5亚型毒株的血凝素基因的克隆与序列分析.pdfVIP

第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 离的H9N2亚型流感病毒的N2基因，发现在中国大陆分离的H9N2亚型流感病毒中，红细胞吸附位点 附位点氨基酸的区别有何作用?有待于进一步研究。序列比较还发现，SS株和F株在63-65位缺失3个氨 亚型的NA基因的颈部缺失与其高致病性质有关。对于H9N2亚型流感病毒的NA基因是否也适用?针对 CK／BJ，l／94可咀导致鸡比较高的死亡率的现象oJ，有必要进一步考证其分子机制。 参考文献略 鸽源禽流感病毒H5亚型毒株的血凝素基因的克隆与序列分析 周宇1王伟利2赵丽1钱爱东i (1吉林农业．大学 2奇沐出八境检验检埴局) 围等方面起重要作用。本研究对从鸽群中分离到1株禽流感病毒初步鉴定为H5N1亚型禽流感病毒的血凝 个氨基酸，该毒株在起始密码子后有30个碱基插入，在HA裂解位点附近有连续6个碱性氨基酸的插入。 Mchicken／HongKong／728／97(H5N1)与A／HongKong／156／97 离株与广东与香港流行株亲缘关系较远，与吉林株亲缘关系较近。 关键词：鸽、禽流感病毒、血凝素基因、高致病性、序列分析 禽流感是有A型流感病毒引起的一种禽类(家禽和野禽)的感染和，或疾病综合征。主要感染鸡、火 鸡、鸭、鹌鹑等家禽、野鸟、水禽和海鸟等的感染。禽流感病毒是分节段的负链单股RNA病毒，在复制 过程中很容易发生基因突变及基因重组，因而决定了AIV具有众多血清型和易变的特点，其中变异最多是 血凝素(HA)蛋白，HA蛋白是病毒表面的主要糖蛋白，结合宿主唾液酸之类受体，帮助病毒穿透宿主宿 主胞膜以及改变抗原性，从而逃脱宿主免疫系统的监视，已经证明HA蛋白是禽流感病毒发生变异的主要 因素，因此研究HA糖蛋白具有重要的意义。为从分子流行病学角度进一步研究流感病毒生态学、分析其 来源及遗传变异和流行规律，本研究对从鸽体内分离到I株禽流感病毒HA基因进行克隆与序列分析，结 果报告如下。 I材科与方法 I．I病毒毒株 鸽源禽流感毒株A／Pigeon／jilin／2004简称IsolateBflJ吉农大预防教研室保存，查找序列为 1．2裁体和茴种 克隆载体pMDl8．T，JMl09大肠埃希氏菌感受态细胞购自宝生物工程有限公司。 1．3试剂 ExTagDNA Marker 聚合酶、限制性内切酶HindlII、XboI、胶纯化回收试剂盒、DNA DL2000等购自宝生物工程有 579 家禽传染病 限公司；质粒提取试剂盒购自鼎国生物公司。 1．4引物合成 根据禽流感病毒已知的基因序列，设计合成一对引物。 Pt：5’，GTCAAGCTI℃AACCAItGGAGAAAATAGTGC．3’ P2：5．-CGCCrCGAGTTAAATGC^AA=11KTG．3’ 1．5病毒RNA的提取 按病毒RNA提取试剂Trizol说明从禽流感病毒的鸡胚尿囊液中提取病毒总RNA．。 1．6ⅡA基因的RT·PcR扩增 s，72{2 1．7HA基因的克隆与鉴定 氨苄青霉素的LB液体培养基中，37{2培养16h，小量提取质粒。 然后对重组质粒进行PCR鉴定与酶切 鉴定． I．814A基因序列比较分析 应用分析软件对整个阅读框内的HA基因序列的核苷酸和推导的氨基酸序列分析，以及与已知知序列 比较分析。 2．结果 2。1HA基因RT-PCR，克隆后PCR篓定及酵切姜定 PCR产物在1％琼脂糖凝胶中电泳检查，HA基因扩增片段大小与预期结果相符约1．7kb。 用限制性内切酶l-IiadIII、XhoI对阳性质粒进行酶切，结果所切片段大小分别为1．7kb和2．6kb，与预 期结果相符。