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家禽传染病 AIV的受体结合位点是由位于HAl上的多个氨基酸组成。通常情况下,对于在同种动物闻相互传播 的毒株来说,这些结合位点是相当保守的。.但当某些位点发生变异时,可导致宿主特异性的改变.本研究 酸Y、w、I、H、E、L和Y所组成。从表3比较结果可看出,这些位点在这些毒株之间是相当保守的, 与广东、香港、泰国及意大利参考毒株的一致.结果提示这些毒株具有相同的易感动物。 HA糖蛋白肽链上的潜在糖基化位点对AIV的毒力也存在着一定影响。一方面,受体结合位点的糖基 化会影响病毒与宿主细胞的结合水平,另一方面,HA裂解位点附近氢基酸的糖基化会影响裂解位点的特 性,从而可能导致病毒毒力发生改变。从表3结果可看出,本研究的4个分离株均有7个保守的潜在糖基 化位点,其中6个位于HAl、1个位于HA2。与广东、香港、泰国及意大利参考毒株的一致,说明这4个 分离株与这些参考毒株有相似的病原特性。此外,圈2系统进化树结果也表明,这4个分离株与广东、香 港、泰国及意大利参考毒株的有着较近的亲缘关系,而与美国参考毒株的亲缘关系较远,属欧亚谱系。 参考文献略 4株鹅源H5亚型禽流感病毒株的血凝素HA基因的克隆与序列分析 王伟利1周宇2矗苎丘2钱爱东2 (1吉林出入境检验检疫尾2吉林农业大学) 摘要:本研究对4株已经初步鉴定为鹅源H5皿型禽流感病毒血凝素(}IA)全基因进行分别进行扩增、 克隆,然后对4个毒株的HA基因阳性克隆鉴定。序列分析结果表明,分离株间的核苷酸同源率为 各潜在糖基化位点丢失。4分离株与参考毒株在裂解位点附近均有相同碱性氨基酸序列插入,经分析表明 4分离株与参考毒株均属于欧亚分支。 关键词;鹅、禽流感病毒、血凝素基因、高致病性、序列分析 禽流感是有A型流感病毒引起的一种禽类(家禽和野禽)的感染和,或疾病综合征。该病毒感染鸡、 火鸡、鸭、鹌鹑等家禽、野鸟、水禽和海鸟等的感染。禽流感病毒是分节段的负链单股RNA病毒,在复 制过程中很容易发生基因突变及基因重组,因而决定了AIV具有众多血清型和高度变异性,在结构蛋白中 血凝素(姒)的变异最频繁,已经证明HA蛋白是禽流感病毒发生变异的主要因素:HA蛋白也是诱导动 物机体产生中和抗体的主要免疫原,是病毒变异、毒力和宿主特异性的主要因素。因此研究HA糖蛋白具 有重要的意义j本次从鹅体内分离到4株禽流感病毒,对这些毒株进行克隆测序,从分子流行病学角度进 一步分析其来源及其演化,研究AI的发生演化,为政府有关部门监控禽的流行与防治提供科学依据。 1材料与方法 1.I病毒毒株 3株鹅源禽流感毒株A/Goose/jilin/Gl/2004、A/Goose/jilin/G2/2004、 590 第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 1.2裁体和茵种 克隆载体pMDl8-T,JMl09大肠埃希氏菌感受态细胞购自宝生物工程有限公司。 1.3试剂 . ExTagDNA Marker 聚合酶、限制性内切酶Hind[]]、XhoI、胶纯化回收试剂盒、DNA DL2000等购自宝生物工程有 限公司:质粒提取试剂盒购自鼎国生物公司。 1.4引物合成 根据禽流感病毒已知的基因序列,设计合成一对引物。 P1:5’一GTC从GCITCAACCATGGAGAAAATAGTGC一3’ P2:5’.CGCCTCGAGTIAAA:【GCAAA:rrI卫rG-3’ 1.4病毒RNA的提取 按病毒RNA提取试剂Tnzol说明从禽流感病毒的鸡胚尿囊液中提取病毒RNA.。 1.5HA基因的RT-PCR扩增 s,72(2 1.6ttA基因的克隆与鍪定 素的LB液体培养基中,37C培养16h,小量提取质粒。 然后对重组质粒进行PCR鉴定与酶切鉴定. L7HA基因序列比较分析 应用分析软件对整个阅读框内的HA基因序列的核苷酸和推导的氨基酸序
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