不利用丙酮酸的丙酮酸生产菌的选育.pdfVIP

冀瀵爱隧蒸熬骧糕裂 不利用丙酮酸的丙酮酸生产菌的选育 高年发 占桂荣 于 明 天津市工业微生物重点实验室 天津科技大学生物工程学院 【摘要】 以光滑球拟酵母(Torulopsis 产酸率分别比原菌增加了26．4％和26．5％。在5升罐上的产酸量和产酸率分别是 70．239／L和64．6％比原菌增加了5．7％和5．3％。 【关键词】 丙醺酸 复合诱变 育种 丙酮酸是重要酌a一氧代羧酸之一，它 条件进行优化，但产量和产率始终不畿得到 不仅在生物能量代谢中具有十分重要的作 显著提意。作者在丙酮酸发酵过程中发现， 用，而且是合成多种有用化合物的前体．在 丙酮酸产量达到一定水平后．葡萄糖消耗速 制药、化工、食品等工业以及科学研究中有 率下降，且丙酮酸产量下降(实验数据显 广泛的用途【1棚，许多维生素、氨基酸的生 示)。这个结果在其他人的有关研究中也有 物合成都是以丙酮酸为起始物。近年来，对 述及[41。经研究分析认为，导致丙酮酸产 毳酮酸及其丙酮酸系列产是的开发刹用正Et 量停滞不前甚至下降的原因是当蒋酮酸含 益深入，商业上的需求也持续增长[41。 量增加到一定水平后．丙酮酸产生菌优先 丙酮酸的发酵法生产研究已有五十年的 利用丙酮酸作碳源进行菌体生长或生成其 历史。鑫本学者经过近四十年鹃研究选育出 它代谢物。作者从此出发，选育不利糟丙 了丙酮酸高产菌株．并于1989年实现了工酮酸的突变株，并对不利用丙酮酸的突变 业化发酵生产，其产酸水平高达67．8∥L。株产酸性能进行了初步研究。通过选育不 但是与其它有机酸发酵生产相比。产酸水平 利用丙酮酸的突变株来提高丙酮酸发酵产 比较低，虽然应用各种方法对其菌种及发酵 量尚未见报道。 ．425． 全国玉米深加工产业交流展示会·论文集 1材料与方法 1．1 出发菌种 气量3L／min，用8mol／L 发酵温度30℃。 glabrata) 光滑球拟酵母(Torulopsis 1．3 诱变方法及突变株的筛选 TPl9(NA一+Bio-+TPP卜+Pdx一)，天津科技大学 有机酸研究室保藏。 1．3．1 1．2培养基和菌种培养 及UV—DES复合诱变 1．2．1 斜面培养基(g／L)：无水葡萄糖 10；蛋白胨5；酵母浸粉3；麦芽汁39；琼 脂20：蒸馏水定容至1L，pH5．0。 次．然后将菌体重新悬浮于适量的生理盐水 1．2．2固体培养基 中．制成细胞浓度为108个／mL的菌悬液。 (1)CaCO，完全培养基(g／L)／丙酮酸 养皿中(带磁棒)，置于紫外诱变箱的磁力 唯一碳源固体培养基(g／L)：葡萄糖40(丙 酮酸唯一碳源固体培养基用丙酮酸钙209代 替葡萄糖)；蛋白胨10；KHzP041；MgSO。·处照射。设定不同的照射时间为不同的UV 7H20 处理剂量。紫外线照射后，暗修复2h涂平 0．5：烟酸8mg；盐酸硫铵素101xg；盐 板。各样品均进行活菌计数，并与对照组比 酸吡哆醇0．5mg；生物素201吨g；琼脂20； CaC03 5．0。 较，计算致死率圈。 5；蒸馏水定容至1L，pH (3)限制培养基：丙酮酸唯一碳源固体