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高纯度燕麦β-葡聚糖测定方法研究 随着人类物质生活水平的提高，人类的饮食结构反而愈不均衡。因此具有显著降血脂、降血糖及维持肠道微生物生态环境功能的燕麦葡聚糖[1~4]的需求市场明显增大，而高纯度的燕麦葡聚糖因其功效更为显著，其需求更为明显。但目前国内外对于高纯度燕麦葡聚糖的检测并无统一标准，这极其不利于高纯度燕麦葡聚糖的研究发展。 目前，谷物麸中β-葡聚糖的测定[4~7]主要是采用AOAC995.16酶法，该方法应用于测定高纯度燕麦葡聚糖的原理虽然相同，但是由于含量的增加，产品的分子量不同，对于酶解的用量，水解的时间等条件有所不同，因此，本文着重研究酶解测定高纯度葡聚糖时的作用条件，并通过对方法的精密度和回收率进行判断方法的准确性。 1 材料 1.1试剂与待测样 70%纯度燕麦β-葡聚糖：广东省食品工业研究所 试剂盒：Megazyme ；K-BGLU 1.2主要仪器设备 移液枪：Tomos；L1160471 恒温水浴锅：上海申胜生物技术有限公司；W201B 漩涡混合振荡器：上海琪特分析一起有限公司；XW-80A 紫外可见分光光度仪：上海美谱达仪器有限公司；UV-6300PC 2 实验方法 2.1测定步骤 准确称量约10mg70%纯度燕麦β-葡聚糖样品到试管内，确保全部样品完全落入试管。 用0.2ml乙醇（50％v/v）湿润样品，加磷酸钠缓冲液（4.0ml，20mM，Ph6.5）并且用振荡器振荡。 然后，马上将试管放入开水中，保持一分钟。用振荡器振荡样品，保持在开水中2分钟，再次振荡。 把含有样品的试管放入40℃水中，保持5分钟。加地衣多糖酶试剂（0.2ml），振荡。 放入40℃水浴中分解2小时，并不时振荡。加醋酸钠缓冲溶液（50ml，200mM，Ph4.0），用振荡器振荡样品。 将试样降到室温。准确用移液枪在三个测定试管中添加0.1ml的已经过地衣多糖酶酶解的高纯度燕麦β-葡聚糖样品。 加β-葡萄糖苷酶试剂0.1ml到三个测定试管中的两个，第三个作为空白，添加0.1ml50mM醋酸钠缓冲液。加GOPOD试剂3.0ml到三个试管中，在37℃水浴中分解20分钟。取出样品，并用分光光度计测定（510nm）。 2.2标准曲线 以标准葡萄糖配成浓度分别为0.0，6.4，9.6，12.8，16.0，19.2μg/ml的标准样品，以分光光度计在510nm下测定吸光度。 表1 标准曲线标样表 Table1 Sample Table of Standard curve 葡萄糖标准曲线 葡萄糖浓度x (μg/ml) 0 6.4 9.6 12.8 16 19.2 吸光度y 0 0.2 0.283 0.377 0.476 0.583 2、精密度实验 配制样品溶液为2mg/ml，分别在4支试管中加入5mL样品溶液，依上述检测方法测定 序号 1 2 3 4 吸光度 0.166 0.170 0.173 0.176 测定值（mg） 5.54 5.69 5.79 5.86 平均值（mg） 5.72 相对标准偏差（RSD） 2.4% 计算方法：RSD=S/X*100 X——测定值的平均值 S——标准差 3、回收率实验 为了确定本方法的准确度,分别取不同量的标准葡聚糖样品到已知含量的燕麦葡聚糖产品中，依据上述检测方法测定。 称取已知含量的燕麦葡聚糖样品125mg，定容到250mL水中，备用； 称取标准葡聚糖样品（含量=8.8%,水分=10.07%）200mg，定容至50mL水中，备用； 每个试管分别移取20ml已知含量的燕麦葡糖溶液，再分别加入0.5ml、1 ml、1.5ml、2 ml、2.5 ml、3ml标准葡聚糖样品溶液，然后定容至25ml，依法测定。 单位：mg 序号 本底值X2 添加量m 加标的吸光度 实测值X1 回收率% 1 5.72 0.158 0.176 0.15 95.3 2 0.316 0.181 0.319 101.2 3 0.474 0.185 0.457 96.5 4 0.632 0.19 0.623 98.6 5 0.79 0.195 0.788 99.8 6 0.948 0.201 0.997 105.2 平均值 - - - - 99.43 回收率计算公式： P=X /m*100% P——加入标准物质的回收率 m——加入的标准物质的量； X——实际测得的标准物质的量； 4、结论： 燕麦葡聚糖的产品是采用AOAC995.16进行检测的，通过对该方法可行性的验证，进行精确度及回收率的实验，结果表明：采用此法的相对标准偏差RSD=2.4%，回收率P=99.43%，因此采用此法进行检测燕麦葡聚糖是可行的。