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RP-HPLC测定单体绿原酸含量 　 作者：廖丽云　徐小平　田晨旭，任霞，谭培 【摘要】 　　目的 应用反相高效液相色谱法测定单体绿原酸的含量。方法 流动相：0.1％甲酸-乙腈（92:8）（pH 2.6），色谱柱：C18（250×4.6 mm,5 μm），测定波长：323 nm。结果 绿原酸在2.50 μg·ml-1～125.00 μg·ml-1范围内线性良好，平均回收率为100.9%。结论 该方法简便、可靠、准确，可用于该制剂的质量控制。 【关键词】 反相高效液相色谱法　单体绿原酸　含量测定 Abstract：Objective To determinate the content of CHA for high-purified raw materials by reversed phase high performance liquid chromatography.Methods HPLC condition was C18 column（250×4.6 mm,5μm）with the mixture of acetonitrile- water( containing 0.1％ formic acid)(92∶8)(pH2.6)as mobile phase at a flow rate of 1.0 mL·min-1 with the detection wavelength at 323 nm.Results The method proved to be linear over the range of 2.50μg·ml-1～125.00μg·ml-1.The average recovery of the assay was 100.9 %.Conclusion The method appeared to be simple,reliable and accurate,and it could be used for the quality control of the preparation. Key words:RP-HPLC;chlorogenic acid monomer;determination 绿原酸(Chlorogenic acid，CHA)，又名3-O-咖啡酰奎宁酸（3-O-caffeoylquinnic acid）是广泛存在于植物中的一种多酚类化合物，其中忍冬类、杜仲、咖啡等植物中含量较高。具有较强的抗变态反应［1］、调节体内血糖［2］、清除氧自由基［3］及抗癌抗HIV［4］等作用，由于其疗效显著、毒副作用小而引起广泛研究［5,6,7］。 虽然绿原酸是中药中最常见的化合物，但是由于其化学性质不稳定，纯化困难。在众多的研究文献中主要报道了绿原酸作为中成药主要成分的形式进行分析和含量测定［8-13］。另外关于绿原酸共存物的研究有少量报道［6,7］，但研究对象多为产品粗提物（含量15%～30%），对于工业化生产的单体绿原酸（含量≥99%）的研究，尚少见报道。而现今从杜仲叶中经过提取加工得到的绿原酸其纯度可达98%。为便于生产质量上的控制，本文采用高效液相色谱法测定高纯度绿原酸的含量，方法简便、精确、重现性好，为单体绿原酸质量标准研究控制提供了科学依据。 1 实验部分 1.1 仪器和试药 高效液相色谱仪、LC-6A型高压泵和SPD-10Avp型UV-VIS检测器（日本岛津公司）。UV-2201紫外－可见分光光度计。pHS-25型酸度计（上海雷磁仪器九厂）；绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所）；绿原酸原料药(批号：010801，010802，010803)由四川九章生物化工科技发展有限公司提供；乙腈为色谱纯；超纯水；其余试剂均为分析纯。 1.2 色谱条件的选择 1.2.1 检测波长选择 由绿原酸流动相中的紫外扫描图谱可知，绿原酸在波长的217.4，232.8和323.6nm处有最大吸收与对照品一致。以保证溶液中存在的物质尽可能分离检出为目的，比较三个波长条件下得出峰的情况，波长323 nm既能检出所有组分，同时受溶剂影响更小。故确定为本试验测定波长为323 nm。 1.2.2 流动相与色谱柱选择 精密称取于105℃干燥至恒重的本品10 mg，加水 100 ml，使溶解，作为供试品溶液。采用不同型号C18柱，检测波长为323 nm，调节流动相乙腈-水比例、水相pH值，取供试液10μl注入色谱仪，记录色谱图。流动相考察了不同乙睛比例、不同pH值对色谱行为的影响。结果表明，乙腈比例的变化对待测组分保留时间影响明显，乙腈对组分峰的锐度影响明显，pH值的下降可减少色谱峰的拖尾现象，相对提高柱效。最后确定流动相为0.1％甲酸-乙腈（92∶8）（pH 2.6）。 采用十八烷基键合硅胶