预牵张对体外培养机械牵张诱导人Ⅱ型肺泡上皮细胞γ-氨基丁酸信号通路活化的影响.pdfVIP

中华危重病急救医学 2017 年 1 月第 29 卷第 1 期 Chin Crit Care Med，January 2017，Vol.29，No.1 · 21 · ·论著· 预牵张对体外培养机械牵张诱导人Ⅱ型肺泡 上皮细胞 γ- 氨基丁酸信号通路活化的影响 罗科 周罗晶 黄天丰 郭唯真 高巨 ， ， （ 、 、 、 ）， 225001 江苏扬州 扬州大学临床学院 苏北人民医院麻醉科 罗科 黄天丰 郭唯真 高巨 （ ） 科教科 周罗晶 ： ， ： 通讯作者 高巨 Email doctor2227@163.com DOI ：10.3760/cma.j.issn.2095-4352.2017.01.005 【 】 摘要 目的 评价机械牵张预处理对机械牵张诱导人Ⅱ型肺泡上皮细胞（AEC Ⅱ）γ- 氨基丁酸 （GABA）信号通路活化的影响。方法 体外培养人 AEC Ⅱ细胞株（A549 细胞），分为对照组（C 组）、机械牵张 组（P1 组）和机械牵张预处理组（P2 组）。C 组常规培养 ；P1 组给予 20% 应变率的机械牵张 6 h ；P2 组给予 5% 应变率预牵张 60 min 后，将应变率调整为 20% 继续牵张 6 h。采用甲基噻唑蓝法测定细胞活性；采用比色法测 定乳酸脱氢酶（LDH）释放率 ；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定细胞培养液中白细胞介素（IL-1β、IL-6） 及肿瘤坏死因子 -α（TNF-α）含量 ；采用反转录 - 聚合酶链反应（RT-PCR）测定 IL-1β、IL-6 及 TNF-α 的 mRNA 表达 ；采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）测定谷氨酸脱羧酶（GAD）和 γ- 氨基丁酸 A 受体 （GABAR）的蛋白表达。结果 与 C 组比较，P1 组细胞活性明显降低（A 值 ：0.196 ±0.071 比 0.886 ±0.107）， A LDH 释放率明显升高〔（12.3 ±2.4）% 比（1.9 ±0.5）%〕；细胞培养液中 IL-1β、IL-6 及 TNF-α 含量和 mRNA 表达量均明显升高〔IL-1β（ng/L）：138.6 ±19.7 比 32.7 ±7.4，IL-6（ng/L）：196.5 ±31.7 比 55.4 ±13.8，TNF-α （ng/L）：111.3±21.8 比 20.8 ±7.6 ；IL-1β mRNA（2-ΔΔCT ）：2.79±0.44 比 0.83 ±0.12，IL-6 mRNA（2-ΔΔCT ）： 1.99 ±0.25 比 0.56 ±0.11，TNF-α mRNA（2-ΔΔCT ）：2.54±0.37 比 0.72 ±0.09〕；GAD 和 GABA R 蛋白表达均明 A 显下调〔GAD（灰度值）：0.38 ±0.12 比 1.75 ±0.45，GABAAR（灰度值）：0.29 ±0.09 比 1.68 ±0.39 ；均 P ＜0.05〕。 与 P1 组比较，P2 组细胞活性明显上调（A 值：0.523 ±0.132 比 0.196 ±0.071），LDH 释放率明显降低〔（6.9 ±1.7）% 比（12.3±2.4）%〕；细胞培养液中 IL-1β、IL-6 及 TNF-α 含量和 mRNA 表达量均明显降低〔IL-1β（ng/L）： 79.2 ±11.6 比 138.6 ±19.7，IL-6（ng/L）：89.6 ±15.6 比 196.5 ±31.7，TNF-α（ng/L）：55.9 ±11.4 比 111.3 ±21.8）； IL-1β mRNA（2-ΔΔCT ）：1.92