应用PCR技术快速诊断感染性角膜溃疡.pdfVIP

· 检验与临床 ·—— 一 2008年 12月第46卷第34期 应用PCR技术快速诊断感染性角膜溃疡 路西林 薛会敏 赵朝贤z杨建峰 ， (1．河北省邯郸市第三医院检验科，河北邯郸056001；2．河北工程大学医学院，河北邯郸056002； 3．河北省邯郸市邯钢医院检验科，河北邯郸056001) 摘【要】目的 探讨PCR技术快速诊断感染性角膜溃疡的临床应用 。方法 以源于医学条件致病性真菌 18srRNA和细菌 16srRNA基因保守区各自的一对寡核苷酸序列为通用引物，对临床拟诊为感染性角膜溃疡的标本进行PCR检测，并与培养 方法进行对 比。结果 在 3lObp处出现DNA扩增带者为真菌感染 ；520bp处 出现 DNA扩增带者为细菌感染；310bp和 520bD处同时出现 DNA扩增带者为真菌和细菌混合感染。32例临床标本培养阳性率为59．38％，而经 PCR扩增阳性率为 78．13％。结论 应用PCR技术检测感染性角膜溃疡速度快、阳性率高，有助于角膜溃疡的病原学快速诊断。 关【键词】PCR；真菌；细菌；角膜溃疡 【中图分类号】R772．21 文【献标识码】A 文【章编号】1673—9701(2008)34—94—02 角膜溃疡是一种严重的感染性角膜病，且致盲率高，许多病 1．3．3 PCR检测方法 PCR总体积为30 L，其中2×TaqPCR 例特别是不典型病例早期明确诊断较为困难，进而延误了治疗， mastermix(由天艮生化科技有限公司提供)15 I，真菌上、下游 造成角膜穿孔、眼球摘除l】】，因此寻找快速、准确的实验室诊断方 引物各 1XIL，细菌上、下游引物各 1 L，DNA模板 2 L，体积不 法对临床早期诊断具有重要意义。培养方法费时费力，远远不能 足部分用无菌双蒸馏水补足 。PCR反应条件为 ：94℃预变性 满足临床诊断、治疗的需要。为此，本实验室采用以源于医学条 5min，94oC 1min，52qC 1min，72℃ 1min，35个循环 ，72℃延伸 件致病性真菌 18srRNA和细菌 16srRNA基因保守区各 自的一对 5min。反应结束后，样品在2％琼脂糖凝胶上电泳，EB染色。紫外 寡核苷酸序列为通用引物，对临床32例拟诊为感染性角膜溃疡 灯下分析观察照相。 的标本进行PCR检测，并与培养方法进行对比。 1．3．4 质量控制 在整个实验过程中均设立阳性、阴性及空白 对照，并严格按照操作规程进行操作3[1。 1 材料与方法 1．1 材料来源 2 结果 选择2007年9月～2008年 1月期问来我院就诊的被临床拟 临床标本测定中，在310bp处出现DNA扩增带者为真菌感 诊为感染性角膜溃疡的32例患者，其中左眼19只，右眼13只。 染，520bp处出现DNA扩增带者为细菌感染 ，520bp和310bp处 1．2 培养方法 同时出现DNA扩增带者为真菌和细菌混合感染。32例临床标本 所有患者均经 1％丁卡因眼角膜局部表面麻醉，在无菌操作 培养阳性率为59．38％(镰刀霉属 11例、链格孢属 2例、曲霉属 1 下用刮铲刮取角膜溃疡边缘组织3份 ，1份做细菌培养 ，在无菌 例、青霉属 1例、念珠菌属 1例；金黄色葡萄球菌 1例、铜绿假单 操作下接种于血琼脂平板，置于(36±1)℃温箱中孵育培养 ，有 胞菌 1例 ；表皮葡萄球菌和镰刀霉属混合感染 1例)，而经PCR 菌落生长者做菌种鉴定 ；第 2份标本做真菌培养 ，在无菌操作 扩增阳性率为78．13％(真菌 l8例 、细菌 5例、真菌+细菌2 下接种于沙氏琼脂培养基斜面，置于25 28cC、湿度40％～ 例)。临床标本培养及P