羟胺法测定青霉素酶酶活的研究.pdfVIP

316． 羟胺法测定青霉素酶酶活的研究 on methodof Studyhydroxylaminedeterminingpenieillinaseactivity 王芳仪宏王丽丽 and Li—li WangFang，YiHongWang (河北科技大学生物科学与工程学院，石家庄050018) ofscienceand university (CollegeofBioscienceBioengineering，Hebeitechnology,Shijiazhuang050018) 摘要：目的介绍一种新型青霉素酶活力的测定方法——羟胺法。方法研究了可能会影响羟胺法的影响因素。结果试验 表Ij：JFe3+、pH对结果无影响，显色稳定，且检测时间不受限制。结论该方法比经典方法碘量法更为简单、快捷、准确。 关键词：羟胺法，青霉素酶，活力，测定 中图分类号：R978．1+l文献标识码：A 青霉素酶属于B．内酰胺酶，可水解青霉素类的p． 解产物既不影响羟胺与青霉素的反应，也不影响羟 内酰胺环，使抗生素失效【-】。目前，青霉素酶常用于 肟酸与三价铁离子进一步反应，则可根据单位时间 抗生素药品质量检测、青霉素过敏者使用，该酶最 内青霉素酶反应前后羟胺法测得的青霉素含量的差 具前景的用途是对牛奶中的青霉素残留量的快速定 值，进而建立一种新的青霉素酶的检测方法。相对 量测定和对青霉素超标牛乳进行处理[2】。它的常用产 于碘量法，羟胺法反应时间短(5min)、显色稳定、 生菌为地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌[3】。 数据重复性好、操作过程简便、操作体系小(只有 目前青霉素酶的活性测定普遍采用碘量’法【·1，此 5mL)，因此比碘量法更有优势。 方法的原理是：青霉素在青霉素酶作用下降解，降 1 材料与方法 解产物青霉噻唑酸能与碘发生反应，根据青霉素酶 1．1试验材料 分解青霉素前后消耗碘量的差值，计算出单位时间 内青霉素降解量，进而折算出青霉素酶的活性。但 溶解，定容至lOOmL。 是碘量法经常受到其他因素的影响，例如反应过程 需要避光、反应时间要准确控制、滴定误差较大、 乙酸钠0．529水溶后，定容至500mL。 操作繁琐、终点判断不明显等，因此系统误差较 大。 青霉素可快速与羟胺反应，生成羟肟酸(见图 1)，后者与三价铁离子可以形成水溶性内络盐而显 红色，在515rim光波下有最大吸收峰。1947年Fordl51 R_≈≯毪H一卜麓釜H 首次应用该原理建立了青霉素的检测方法，1990年 图1青霉素与羟胺反应原理 吴芝清【s】等人又改进了羟胺法，增加了显色的稳定 Mechanismofreaction Fig．1 between and penicillin 性。青霉素酶能够分解青霉素，如果青霉素酶的分 hydroxylamine 收稿日期：2009．12—05 作者简介：王芳，女，生于1984年，在读硕士研究生，主要从事发酵工程。E-mail：wangfan9405@163．COIII 羟胺法测定青霉素酶酶活的研究王芳等 ．317 胺与碱性缓冲液等体积混合即成。