管式磁性微粒子化学发光免疫分析法测定人尿液中的雌三醇.pdfVIP

第39卷 分析化学(FENxIHUAXUE)研究简报 第l期 2011年1月 ChjneseJoumalof 62～66 AnalyticalChemistry 管式磁性微粒子化学发光免疫分析法测定人尿液中的雌三醇 郑国金1，4 方卢秋珥 陈惠4 李振甲3 应希堂3 林金明叫 2(长江师范学院化学化工学院，重庆408loo) (楚雄医药高等专科学校化学教研室，楚雄675000) 3(北京科美东雅生物技术有限公司，北京 l删) 4(清华大学化学系，北京l00084) 摘 要 待测尿液中的雌三醇、辣根过氧化物酶标记的雌三醇与异硫氰酸荧光素(FITc)标记的兔抗雌三 醇抗体在均相体系中发生竞争性免疫反应。再加入用羊抗FITc抗体包被的磁微粒，反应生成物结合在磁微粒 上，在磁场中经分离、洗涤后加发光底物，检测发光强度(RLu)，测定尿液中雌三醇的含量。通过对检测条件 的优化，建立了磁性微粒子化学发光免疫分析法测定人尿液中雌三醇的方法，并对正常男性、女性和孕妇的尿 液中雌二三醇含量进行了测定。结果表明，本方法的线性范围为l～100 pg几。检出限为0．25pg／L，具有很高的 灵敏度；批内相对标准偏差14％；批间相对标准偏差7％，具有良好的稳定性和重现性。 关键词 雌三醇：化学发光免疫分析；磁性微粒子：尿液 1 引 言 雌i醇(Estriol，E3)是重要的内源性雌性激素之一。人体内存在游离雌三醇和结合雌三醇，男性及 未孕女性体内的雌三醇含量很低。正常孕龄女性体内雌_二醇的主要来源是雌二醇和雌酮的代谢产物； 孕妇体内雌三醇的主要来源是婴儿和胎盘，且含量一般较高。通过检测孕妇血清或尿液中雌i醇的含 量，可以判断胎儿的发育状况。因此，快速、准确地检测血清或尿液中雌三醇的含量对于科研和临床应 用都具有重要意义。目前，检测游离雌三醇或总雌t醇的常用方法有高效液相色谱法(HPLc)【l’2】、液相 高特异性的特点，利用磁性微粒子的分离特性，快速、准确地对人体尿液中的雌三醇含量进行了化学发 光免疫检测。 雌i醇(E3)是一种半抗原小分子，有免疫反应性。实验中采用竞争法对尿液中的雌三醇进行分 记的兔抗雌三醇抗体(FITc—E3抗体)发生竞争性免疫反应。再加人用羊抗FITc抗体包被的磁微粒，反 应生成物结合在磁微粒上，在磁场中经分离、洗涤后加发光底物，用冷光分析仪检测发光强度(RLu)，测 定尿液中雌三醇的含量。检测原理如图1所示。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 F1ash’n LB955 glow 验中分离温度为4和25℃，转速13000r／min；磁性分离器(北京科美东雅生物技术有限公司定制，磁场 强度2800Gs)；xw80旋涡混合器(上海精科实业有限公司)；试管12×60mm(浙江拱东医用塑料厂)；磁 性微粒子(磁性分离剂，Adaltis公司)。 雌三醇标准品(sigma公司)；兔抗E3抗血清、羊抗FITc抗体包被的磁性微粒子(5g／L)、FITC标记 的兔抗雌三醇抗体、HRP标记的E3抗原、发光底物及PBsT洗涤液，均由北京科美东雅生物技术有限公 nHnol／L 司提供；其它试剂均为分析纯。标准品稀释液为50 201伊04一05收稿；20lO07—08接受 本文系国家自然科学基金(No资助项目 ‘ Email：jmlin@mail．tsinghua．edu．cn 第l期 郑围金等：管式磁性微粒子化学发光免疫分析法测定人尿液中的雌三醇 63 O．5％水解明胶，O．1％Proclin)。 图l 尿液中雌三醇的检测原理 ofdete珊inationofestriolinhumanurine Fig．IPrinciple 2．2实验步骤 2．2．1 PBS—BSA缓冲