示差折光-液相色谱法测定蜂蜜中β-呋喃果糖苷酶残留量.pdfVIP

第40卷 分析化学(FENXI HUAXUE)研究简报 第10期 2012年10月 ChineseJournalof 1602～1606 AnalyticalChemistry 示差折光-液相色谱法测定蜂蜜中伊呋喃果糖苷酶残留量 王艳’ 吴斌 张晓燕 沈崇钰 张睿 李丽花 费晓庆 赵增运 (江苏出入境检验检疫局食品实验室，南京210001) 摘 要 4．50)中50℃下反应16h后的酶解 基于p呋喃果糖苷酶与棉子糖在柠檬酸一氢氧化钠缓冲介质(pH 产物蜜二糖含量的变化，建立了高效液相色谱示差折光检测(HPLC-RID)技术测定蜂蜜中伊呋喃果糖苷酶残 mL／min，检测 留量的新方法。以AgilentCarbohydrate柱为分离柱，乙腈一水(78：22，V,／V)为流动相，流速为1．4 器为示差折光检测器，柱温和检测器温度均为35℃。结果表明，蜂蜜样品经过聚丙烯酰胺凝胶柱分离后，样 品峰形得到简化，灵敏度提高了1-3倍；方法的线性范围为10～200 U／kg；测出限为10U／kg；回收率为81．3％～ 112．4％；相对标准偏差为3．7％～9．7％(竹一6)。当蜂蜜样品中伊呋喃果糖苷酶含量20 U／kg时，判定为阳性 样品，即掺假蜂蜜。 关键词I争呋喃果糖苷酶；蜂蜜；示差折光；液相色谱；掺假 1 引 言 天然纯正蜂蜜因其具有较高的营养价值o’2】，受到众多消费者的青睐。但一些不法商贩，为了谋取 利润，在蜂蜜中加入糖浆、白砂糖、蜂蜜香精等物质，不仅影响了蜂蜜原有的营养价值，也损害了我国蜂 产品在国内外市场上的信誉。 目前，测定蜂蜜掺假的方法主要有C一稳定同位素分析法p~5】、高效液相色谱法【6]、薄层色谱法(TLC 法)‘刀和红外光谱法吲等。C一稳定同位素分析法主要包括元素分析同位素比值质谱法(EA-IRMS)和液相 掺杂少量c3植物糖的蜂蜜样品存在缺陷。针对这一问题，费晓庆等【131提出了液相色谱／元素分析一同位素 比值质谱联用技术，进一步提高了鉴别蜂蜜掺假的能力。TLC法测定掺入甜菜糖浆的蜂蜜有局限性。 在加工掺有甜菜糖浆的蜂蜜过程中，人为添加了伊呋喃果糖苷酶，该酶非蜂蜜本身所具有，用于酶 解甜菜糖浆，可以催化水解其p-D一果糖苷键，将其转化为一分子葡萄糖和一分子果糖。借助以上方法 无法鉴定真蜂蜜与这种掺有甜菜糖浆的蜂蜜的成分区别。针对这种情况，本研究建立了一种检测蜂蜜 中p呋喃果糖苷酶方法，为蜂蜜打假鉴别提供了一种新的监控手段，具有重要的现实意义。 本方法对蜂蜜样品进行了净化，去除了样品中的果糖，促进反应的正向进行，灵敏度提高了1．3倍。 由于本方法根据酶解产物蜜二糖的含量进行定量分析，而非果糖和葡萄糖的含量，因此，大大提高了方 法的准确性。 2 实验部分 2．1仪器、试剂及样品 mm×4．6 mm， 5 医科大学仪器厂)；0．45¨m水相滤膜和0．22Hm有机相滤膜(上海百赛生物科技有限公司)。 Bio—Gel@P一2聚丙烯酰胺凝胶(0．45～0．16mm粒径，BIO-RAD 檬酸(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；五水棉子糖(纯度为98％，北京中棉紫光生物科技有限公 司)；蜜二糖(纯度为99．8％)，p-呋喃果糖苷酶(CAS号：9001-57-4，332．8U／mg)，购于美国Sigma公司；乙 2012-02-10收稿；2012-04-18接受