淀粉酶活性常量与微量测定方法比较.pdfVIP

2014年第4期 江苏调味副食品 总第139期 淀粉酶活性常量与微量测定方法比较 李 兰，雷晓冬 (河南科技学院生物工程系，河南新乡453003) 摘要：以实验室保存的淀粉酶产生茵枯草芽孢杆菌为出发菌株，经过平板分离、点种、碘熏蒸，筛选出产淀粉酶活力较 高的菌株。本实验重点采用常量测定法和微量测定法对酶活性进行测定，并对所得数据进行比较分析，结果显示，两种方法 测定的酶活性差异不明显，说明微量测定法是可以代替常量测定法的。 关键词：枯草芽孢杆菌；淀粉酶；DNs；常量测定；微量测定 中图分类号：Q946．5文献标志码：A 文章编号：1006—8481(2014)04一0033—05 淀粉酶是水解淀粉和糖原酶类的统称，能够 1．1．1 出发茵株 水解淀粉分子，生成包括糊精在内的不同水解产 实验室试管保存的枯草芽孢杆菌。 物，并逐步生成由葡萄糖单位组成的聚合物。微 1．1．2试剂 6．0)，o．4moL／L氢氧化钠 生物的许多种类都能产生淀粉酶，枯草芽孢杆菌 柠檬酸缓冲液(pH 是其中主要生产菌种之一。淀粉酶是最早实现工 溶液，1％淀粉溶液，3，5-二硝基水杨酸(DNs)，标准 业化生产，迄今为止用途最广、产量最大的酶制剂 葡萄糖溶液(1g／L)。 品种。特别是20世纪60年代以来，由于酶法生产1．1．3培养基 葡萄糖以及用葡萄糖生产异构糖浆的大规模工业 斜面培养基：可溶性淀粉1％，牛肉膏1％，蛋白 化，淀粉酶的需要量越来越大，几乎占到整个酶制 胨l％，酵母膏0．2％，氯化钠0．5％，琼脂2％， 剂总产量的50％。目前淀粉酶被广泛应用于多个 6．5。 pH 领域，因此，做好淀粉酶活性测定工作具有重要 种子培养基：葡萄糖5％，牛肉膏1％，蛋白胨 6．5。 意义。 1．5％，酵母膏0．2％，氯化钠0．5％，pH 测定仅一淀粉酶活性的方法有分光光度法、应交 发酵培养基：可溶性淀粉5％，牛肉膏1％，蛋白 扩散法、3，5一二硝基水杨酸法、黏度计法和降落值 胨1．5％，酵母膏o．2％，氯化钠0．5％，氯化钙1％， 6．5。 法。目前，3，5一二硝基水杨酸法是最常用的方法。 pH 在大多数测定淀粉酶的实验和标准中，都是采用常 1．1．4仪器 规的方法和步骤，试剂用量较大，且操作过程不够 简便。本实验选用的产淀粉酶菌株是实验室保存 箱，恒温水浴锅，电热恒温培养箱，YPw-I型迥转式 的枯草芽孢杆菌，经过平板分离、点种、碘熏蒸，筛 恒温调速摇瓶柜，80—1离心沉淀器，净化工作台， 选出淀粉产酶活性较高的菌株；通过常量和微量两 JA5002电子天平，蒸汽消毒器，电炉，电磁炉等实验 种方法分别测定淀粉酶活性，并对测定结果进行比 室常用仪器。 较分析，希望可以提供一种能够代替常量测定的经 1．2 实验方法 济、有效、简便的方法。 1．2．1菌种的筛选及保存 1．2．1．1菌种的筛选 1材料与方法 将试管保存的制备枯草芽孢杆菌成菌悬液，分 1．1 材料