原虫检验技术2010培训陕西.pptVIP

疟原虫检验技术 中国CDC寄生虫病所疟疾室 郑 香 采集血样 采血部位：耳垂或无名指， 取血方法：通常在耳垂取血，先用75%酒精棉球消毒取血部位，待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方或无名指指尖，右手持消毒针迅速刺入皮肤，不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻挤压出血。厚血膜血量约一粒米大小,薄血膜血量为厚血膜的一半或1/3。 标准的疟疾厚薄血膜片 血片染色 吉氏染液(原液)的配置 吉氏染粉 (Azure B type) 5g 甘油 (纯) 250ml 甲醇 (纯) 250ml ●吉氏粉放入研钵中，加少量甘油充分研磨, 然后边加边磨，直至甘油加完，将研磨的染液倒入棕色瓶中，在 研钵中加入少许甲醇清洗研钵，然后倒入棕色瓶中，再放入甲醇清洗，反复数次，直至甲醇用完。盖好瓶盖，将染液充分摇匀，置于室内，每天晃动数分钟，存放一周后经过滤即可使用。保存时间越长染色效果越好。 ●整个染色液配制时间不能少于5个小时 稀释吉氏原液 ●原液需经缓冲液（PH7.0）或净水稀释后，方可用于厚薄血片染色。 ●吸取原液时，不要晃动瓶子,以免沉淀物泛起影响染色效果. 操作1 （快染） 量筒内量2ml缓冲液(PBSPH7.0) 或净水，直接滴加吉氏原液7滴，混匀，滴入待染标本的厚薄血膜上，染色10min，清水缓缓冲洗，晾干（血膜朝内面）镜检。 操作2 (慢染) 在量筒内量2ml缓冲液或净水， 再滴加吉氏原液4滴，混匀，滴入待染标本上，染色30min。清水缓缓冲洗，晾干镜检。 质量好的染色 显微镜下核呈红色,胞浆呈蓝色，薄血膜平整，红细胞单层排列 如果血片偏红,说明染液偏酸性 如果血片偏蓝,说明染液偏硷性 血片制作与染色注意事项 ● 载玻片必须清洁无油污 ● 固定薄血膜时，甲醇不要触碰到厚血膜 ● 放置3天以上的血片，在染色之前先用清水滴加在厚血膜上进行溶血，以防厚血膜染色后颜色发黑，影响镜检. ● 血片充分干燥后方可染色，防止冲洗染液时厚血膜脱落. 疟原虫密度计算 计算疟原虫密度的三种方法： ● 白细胞原虫密度计数法　(厚血膜 WHO) 优点：可作为定性和定量分析 ● 半定量计数法 (厚血膜) 优点：方法简便 缺点：只能定性，不宜作为定量分析 ● 红细胞感染密度计算法　(薄血膜) ● 在厚血膜按视野顺序，从看到第一个疟原虫计数开始，记录200个白细胞中的疟原虫数（可分有性体和无性体），如果原虫密度较低，可增加白细胞计数500~ 1 000 个。 ● 白细胞疟原虫计算公式： 疟原虫数 ÷ 计数的白细胞数 × 患者每微升血白细胞数 = 疟原虫数/μl血。 ● 如果不知患者的白细胞数，则每微升血以8 000个白细胞计数(国际标准) 。 白细胞疟原虫计数法举例 ●假设计数200 WBC中有35个疟原虫，在不知患 者白细胞数的情况下，以每微升血8000个白细 胞计数, 由此计算出每微升血液疟原虫密度为： 人体四种疟原虫的分布 感染人的疟原虫有四种: 恶性疟原虫 P. falciparum 间日疟原虫 P. vivax 三日疟原虫 P. malariae 卵形疟原虫 P. ovale 恶性疟 P.falciparum ● 分布热带、亚热带，是非洲的重要疾病 ● 我国流行区域为云南省和海南省 ● 四种疟原虫中致病力最强，无免疫力者 感染后出现急性症状,不及时治疗可危及生命（脑型疟） 间日疟 P.vivax ● 间日疟原虫分布于我国大部分地区,主要是中部地区 ● 病程良性, 有复发 三日疟 P.malariae ●遍及热带和亚热带地区，特别是东、西非洲，圭亚那及印度部分地区，呈片状、块状分布 ●三日疟在我国非常少见，只在南方广西有过散在报告 卵形疟 （蛋形疟） P.ovale ●主要分布非洲。太平洋地区、缅甸、东南亚有散在报告 ●在我国已基本消灭 四种疟原虫形态特征 镜检示教 以下血片采自现症病例 读片练习 原虫镜检 红细胞不涨大 小滋养体（环状体）纤细, 常有多重感染，环状体内可有2个核 环状体可贴在红细胞边缘 血片中没有其他发育期的大滋养体 配子体呈新月形或腊肠形 成熟裂殖体约含16-32个裂殖子 可出现茂氏点 恶性疟（P.falciparum） 鉴定 要点 红细胞通常涨大