史上最强生物课件动物细胞工程—220108.pptVIP

1.为什么要培养动物细胞？ 2.要培养动物细胞，对取材有何要求？ 动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 ?抗体 ?抗原 ?应答 ?抗体的不纯性 ?怎么才能得到纯的抗体? ?光纯还不行,还要大量.怎么办? ?但，有问题: ?找，什么细胞能无限繁殖呢? ?思路就出来了: 结合同位素的单抗 动物细胞工程小结 动物细胞培养：原理、营养、条件、过程、细胞生长特点、结果、应用 动物细胞融合：原理、诱导方法、过程、应用 单克隆抗体的制备：原理、过程、特点、应用 核移植与克隆动物：供体、受体、核移植方法、克隆动物的方法、克隆动物的遗传特性、应用 动、植物细胞工程的比较：植物组培技术与动物细胞培养技术、植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术 （1）融合后的杂种细胞容易成活吗？ （2）制备单克隆抗体的过程应用了哪些细胞工程技术手段？ （3）在整个制备的过程中要经过几次筛选？ 通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔细胞培养板上培养，使每孔细胞不超过一个，再由这些单细胞克隆生长，然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。 ②再筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 阳性孔 方法——抗原-抗体杂交法 在单克隆抗体制备过程中，两次筛选的原理和方法是不相同的。 ⑻如何得到大量的单克隆抗体？ 体内培养 体外培养 单克隆抗体 ——化学性质单一、特异性强 动物细胞受到抗原刺激,引起免疫反应产生的球蛋白. 不是自己的而又能引起免疫应答反应的物质就是抗原. 一种抗原有多种不同的决定簇,刺激的是多种B细胞,作用于不同的B细胞后,会产生多种抗体, 这是多克隆的, 故不纯! 1.制备单克隆抗体的思路 抗原 B细胞 浆细胞 抗体 刺激 要想获单一的纯抗体,就必须从一个B细胞出发. 让B细胞大量繁殖(克隆)就可以产生大量抗体了. B细胞是不能无限繁殖的.怎么办? 癌! 只有癌细胞. 但它不能产生抗体. 癌细胞能无限繁殖,但不能产生抗体.B细胞能产生抗体,但不能大量繁殖.融合呀!只要将两个细胞融合即可互补. 2.技术思路的重点 杂交瘤细胞 HAT筛选? McAb 大量培养 PEG诱导细胞融合 免 疫 B 脾 矿物油 骨髓瘤 瘤 问题: 在培养体系中, 有4种细胞. B细胞、瘤细胞,和杂交细胞。 我们还是拿不到McAb,怎么办? 筛选！筛出杂交瘤细胞。怎么筛? 又是一个思路问题。 关键一步 单克隆抗体 筛选 杂交细胞 杂交瘤细胞 体外或体内 细胞培养 筛选 骨髓瘤 细胞 诱导细胞融合 特异性杂交瘤细胞 杂交瘤细胞系 提取 经过免疫的 B淋巴细胞 动物细胞融合技术 动物细胞培养技术 单克隆抗体的制备过程： 特点：既能产生专一抗体又能大量繁殖 特点：特异性强灵敏度高可大量制备 注射抗原 免疫 4、单抗隆抗体的应用 ①作为诊断试剂 ②定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病 用于体外诊断人类和动植物疾病及病原鉴定，纯度高、特异性强，具有准确、高效、简易、快速的优点。 ③用于治疗疾病和运载药物 利用同位素标记单抗，在特定组织成像 制成生物导弹，将药物定向带到癌细胞所在的位置，在原位杀死癌细胞，疗效高、副作用小。 单克隆抗体的优点： 特异性强，灵敏度高，并可以大量制备。 ⑵用于治疗疾病和运载药物 ①特异性强、灵敏度高 生物导弹——单克隆抗体＋抗癌药物 ②疗效高、毒副作用小 结合同位素的单抗 -----生物导弹 -----生物导弹 单抗 放射性同位素 克服远缘杂交障碍 使远缘杂交成为可能 意义 培育作物新品种 制备单克隆抗体 用途 获得杂种植株 获得杂种细胞或细胞产物 结果 聚乙二醇、离心、振动、电激、 聚乙二醇、离心、振动、电激、灭活病毒 诱导方法 去除细胞壁 分散成单个细胞 融合前提 细胞膜的流动性和植物细胞的全能性 细胞膜的流动性 原理 植物体细胞杂交 动物细胞融合 项目 ⑶图中B为________过程， 常用_________作为诱导剂 ，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________ 。 B 体外培养 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 足够数量的细胞群 注射到 小鼠腹腔 A C 1.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破