骨髓间充质干细胞和成纤维细胞的蛋白质组学比较.docVIP

　　骨髓间充质干细胞和成纤维细胞的蛋白质组学比较 作者：赵亮，魏旭峰，孙阳，陈瑜，易定华 【摘要】　　目的：采用蛋白质组学 方法 研究 人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)和成纤维细胞中的蛋白表达差异.方法：对hBMSCs和成纤维细胞的蛋白样本进行双向凝胶电泳分离，通过比较两种细胞的蛋白组学图谱，确定差异表达的蛋白点；而后对差异点进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 分析 和蛋白数据库信息检索；最后选取其中的5种蛋白进行SCs和成纤维细胞中鉴定出29种差异表达蛋白，其中有17种蛋白在两种细胞中有显著差别地表达，另外12种蛋白在两种细胞中有相同丰度地表达.SCs与成纤维细胞中蛋白的差异表达体现了两种细胞在细胞形态、结构和功能上的异同性，这对于研究hBMSCs向成纤维细胞分化以及 应用 hBMSCs构建组织工程瓣膜具有重要意义. 【关键词】骨髓间充质干细胞成纤维细胞蛋白质组学 　　【Abstract】AIM:TofindoutthedifferencesandsimilaritiesontheprotEinexpressionsbetanbonemarroesenchymalstemcells(hBMSCs)andhumanfibroblasts, ilarcellmorphology.METHODS: The protEInextractshBMSCsandfibroblasts,andseparatedbytensionalgelelectrophoresis(2-DE).Andthenthedifferentialproteinspotsatrix-assistedlaserdesorptionionization-timeofflight-massspectrometry(MALDI-TOF-MS).Theresultsfromsimultaneousproteomicprofilingongthem,17proteinsthatinfibroblasts,andanother12proteinsequallyexpressedinthe2typesofcells.CONCLUSION:ThedifferentialproteinexpressionsbetightbevaluableforfurtherstudyoffibroblastsdifferentiationfromhBMSCsandtheapplicationofhBMSCsforcreatingtissueengineeredheartvalvesinthefuture. 　　【Keyarroesenchymalstemcells；fibroblasts；proteomics 　　0引言 　　骨髓间充质干细胞（BMSCs）是 目前 理想的组织工程瓣膜间质细胞的种子细胞；相对于血管来源的种子细胞,MSCs具有获取方便、多向分化潜能，以及独特的免疫特性，能够在同种异体微环境中组织中产生免疫耐受的优点［1-2］.该研究拟全面比较hBMSCs和成纤维细胞中蛋白表达的差异，进一步在蛋白水平理解两种在细胞结构和功能差异.这对今后研究hBMSCs在体外向成纤维细胞的分化诱导，以及应用hBMSCs构建组织工程瓣膜是非常必要的. 　　1材料和方法 　　1.1材料人骨髓来源于本院骨髓穿刺室，经过骨髓细胞学检查排除了血液系统的恶性疾病.人成纤维细胞（HDF）是购自CellApplications公司（.cellapplications.index.htm）.细胞分离、培养的主要试剂：Percoll淋巴细胞分离液(密度为1.073g/mL)，DMEM/F12（低糖），磷酸盐缓冲液(PBS)，硫酸链霉素、青霉素（均自Gibco，USA），胎牛血清，CD34，CD44，CD29和CD105抗体（Sigma，USA）.双向凝胶电泳的主要试剂：尿素、硫脲和甘油（均自Sigma，USA）,CHAPS(美国Merck),两性电解液、IPG预制胶条(pH3～10，130mm)和碘乙酰胺（均自Bio－Rad，USA）,Bradford蛋白质检测试剂盒(上海申能博彩生物 科技 有限公司).SCs的鉴定:骨髓经肝素钠生理盐水(1200U/mL)肝素化后，PBS液洗涤、离心,弃掉骨髓中的脂滴等杂质，而后采用Percall淋巴细胞分离液进行密度梯度离心，获得的单核细胞静置培养于DMEM/F12培养液（含100mL/L的胎牛血清，2mmol/L谷氨酰胺(Bio-SCs扩增至第3代时，采用流式细胞术分析hBMSCs的表面分子.细胞不表达造血标志CD34,CD45,而强表达CD29,CD105，阳性率分别为99.4%和99.5%［3-4］.同时，在培养的第3代细胞体系中加入成骨细胞和脂肪细胞