M13噬菌体单链基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书.docVIP

◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 M13噬菌体单链基因组DNA快速提取试剂盒 目录号：D目录编号 包装单位 D50次 D02 100次 D03 200次 适用范围： 适用于快速提取M13噬粒单链DNA 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成 保存 50次 100次 200次 结合液MB 室温 25 ml 50 ml 100 ml 漂洗液WB 室温 15 ml ml 2×25 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇 洗脱缓冲液EB 室温 10 ml 20 ml 40 ml 吸附柱AC 室温 50个 100个 200个 收集管（2ml） 室温 50个 100个 200个 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 储存事项: 结合液MB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。产品介绍： M13和其它的丝状噬菌体载体，在文库构建和为序列测序提供单链DNA和引人突变方面十分有用。将适量M13丝状噬菌体或者相关噬粒（M13来源）感染的液体培养物离心，上清中的单链噬菌体DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净噬菌体单链DNA从硅基质膜上洗脱。 产品特点： 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 节省时间，简捷，单个样品操作一般可在10分钟内完成。 产量高，典型的产量800μl M13丝状噬菌体上清可以提取3μg噬菌体单链DNA。 多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9。可以直接用来测序，一般典型可辨认读长达650bp。 注意事项 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 开始实验前将需要的水浴先预热到50℃备用。 结合液MB含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。 操作步骤（实验前请先阅读注意事项） 以800μl噬菌体感染细菌培养上清提取举例提示：第一次使用前请先在漂洗液WB中加入无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入! 将M13丝状噬菌体或者相关噬粒（M13来源）感染的液体培养物分装在1.5毫升离心管，12,000rpm离心5分钟沉淀菌体。 小心取800μl上清转入新的1.5ml离心管，加入400μl结合液MB，充分混匀。 如果使用的上清大于或者小于800μl，则结合液MB的用量需要按照比例增加或者减少。 将上述混合物加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）1,000rpm离心15秒，倒掉收集管中的废液。 吸附柱一次最多只可以容纳大约700μl混合物，因此需要分次把混合物加到吸附柱内，重复步骤3。 加入00μl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30秒，弃废液。 将吸附柱AC放回空收集管中，1,000rpm离心分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加60μl洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在 50℃水浴中预热）， 室温放置1分钟，1,000rpm 离心1分钟。如果想得到较多量的DNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，10,000rpm离心1分钟。 洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于40μl，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。 DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。 附录（M13噬菌体感染细菌培养上清准备过程）: 下面举例说明M13噬菌体感染细菌培养上清准备过程，详细的M13噬菌体（或M13来源噬粒）培养和上清准备过程请参见『分子克隆』第二版。 37℃ 振摇过夜培养合适的噬菌体宿主菌（如JM109）。 使用6％的过夜培养菌接种新鲜的LB培养液，37℃振摇培养一个小时。 根据M13噬菌体的储存液的浓度（滴度）按照0.5-1.5%(V/V)的比例加入噬菌体来感染宿主菌。37℃振摇培养5-6个小时。 将上面M13丝状噬菌体或者相关噬粒（M13来源