Eppendorf 5075.pdfVIP

文献参考 epMotion 5075 如何出色地完成 96 通量的质粒抽提和 PCR 产物的纯化工作 Eppendorf epMotion 5075 VAC 是新一代的全自动分子生物学工作站， 能够实现高通量核酸分离纯化的无人 操作，同时也是高通量操作实验室最 佳的移液操作平台。 本文详细描述了 epMotion 5075 VAC 工作站在提取 96 个样品的质粒 DNA、BAC DNA 以及 PCR 产物的纯 化三个高通量实验的应用，对抽提和 纯化的核酸得率、质量和操作方式做 了详细的评测。 应用一：epMotion 5075 VAC 进行 96 个克隆的质粒全自动抽提 材料与方法 工作站操作流程 ● Eppendorf epMotion 5075 VAC 工作站 收集的菌体直接置入 epMotion 5075 VAC 工作站中， ® ● Eppendorf Perfectprep Plasmid 96 Vac Direct Bind Kit 运行预设程序中的 ep Plasmid 96 Vac DB 程序，得到的质 ● 96- 克隆的质粒文库，IRAT-1（来自 Mammalian Gene 粒 DNA 会被洗脱在 70 μl低盐的 TE 缓冲液中。 Collection ） ● 单克隆 - pSV- β-galactosidase，宿主菌为 TOP10 细菌的培养 96 克隆的质粒文库：96 深孔培养板中每孔各加入 1.2 ml LB 培养基含 50 μg/ml 氨卞青霉素 ，然后用96 针式接种复 制器接种，接种源为甘油保存的冻存文库。接种后的培养板 在 37℃ 300 rpm 摇床中过夜培养 18 个小时。培养板在 1900 × g 的离心力下离心 5 分钟，去上清，收集菌体，倒 置在吸水纸上除去残余的培养液。 图 1： epMotion Editor 软件显示的 ep Plasmid 96 Vac DB 程序中工作台面的设置和布局 单克隆：将融化 300μl 的甘油冻存的 TOP10 细胞接种 于含 50 μg/ml 氨卞青霉素 的 600 mL LB 培养基中，TOP10 菌株中含有 pSV- β-galactosidase 质粒。接种后的培养液 在 37℃ 325 rpm 摇床中过夜培养约 16 个小时，细菌数量达 到 OD600 的读数为3.0。在 96 深孔培养板中每孔分装 1.2 mL 培养物，收集菌体，方法同上。 10 文献参考 No. 4 表 1 ： ep Plasmid 96 Vac DB 程序中工作台面的设置和布局详细说明 位置编号 实验耗品 实验耗品说明 A2 ep T.I.P.S. Motion 1000μl 96 个样品所需的 96 个吸头 A3 ep T.I.P.S. Motion 1000μl 96 个样品所需的 96 个吸头 A4 收