乳酸乳球菌电转化方法的优化.pdfVIP

．?— — ??．?——? 江苏农业科学 ????年第 ??卷第 ?期? 于建 宁，宋小敬 ，王公金 ，等．乳酸乳球 菌电转化方法 的优化???．江苏农业科学，????，?????：??— ??? 乳 酸乳球菌 电转化方法 的优化? 于建宁?，宋小敬?，王公金?，潘伟芹?，徐小波?，于峰祥?，李? 燕? ??．江苏省农业科学院畜牧研究所 ，江苏南京 ??????；?．山东省荣 成市畜牧兽 医局 ，山东荣成 ??????；? ?．南京师范 大学 医学分子生物学重点实验室 ，江苏南京 ???????? 摘要：乳酸菌转化效率不高是制约其广泛应用的关键因素。为建立乳酸乳球菌的高效电转化方法，主要从电压、? 电阻 、细菌生长 时期 及电击缓 冲液 等影 响电转化的因素入手 ，根据 每微 克 ???获得 的转化子 的多少 ，评 价乳 酸乳球菌? 的 电转化效率 。结果显示 ：当电压 为 ?．????、电阻为 ?????、细菌处 于对数生 长中期 、电击 缓冲液为磷 酸缓冲液 时 ，电? 击乳酸乳球菌 ??????的转化效率最高，为 ?????个／??。表明通过优化电转化参数，可以提高乳酸乳球菌的转化效? 率 ，为拓展乳酸乳球 菌的应用范围奠定基础 。? 关键词 ：乳 酸乳 球菌 ；电转化 ；电压／电阻 ；生长时期 ；电击缓 冲液? 中图分类号 ：????．?? 文献标志码 ：?? 文章编 号 ：????— ????????????— ????— ??? 乳酸菌 ?????????????????????，????是一类广泛分布于 自然? 游的部分开放 阅读框 、多克隆位点 、来 自乳酸乳球菌乳脂亚种? 界 ，在工业、农业和医学等领域 与人类生活密切相关 ，微好 氧，? 蛋白酶基 因的转录终止子及 ?????复制子 、红霉素抗性基因? 能够发酵碳水化合物 、产生乳酸 的革 兰氏阳性菌 。乳酸 菌包? ???等组成 。近来 ，科研工 作者 以 ??????为基 本质粒 进行? 括乳球菌和乳杆 菌，其 中乳 酸乳球 菌 ????????????????????是乳? 了很 多改造 ，如加上 ????基 因、???基 因、????基 因等 ，替代? 球菌属 ?????????????中最重要 、最典 型的一个种 ，乳酸乳 球菌? 原有 的红霉素抗性 ，使该质粒得到了更深入 的应用? 。? 为兼性 厌氧的革 兰氏阳性球菌 ，细胞对称生长 ，因易 于培 养、? 由于乳酸乳球菌属于革 兰氏阳性菌 ，具 有厚且致 密的刚? 生长迅速等优点而成为表达外 源基 因的理想菌株 ，因此 常作? 性细胞壁 ，常规的化 学方法无法使 外源 ???进人 受体 细胞 。? 为乳酸菌基 因工程受体菌的标 准菌株 。与 目前 日益完善的大? 目前 ，乳酸菌转化外 源 ???的方法主要有原生质体转化法和? 肠杆菌 、酵母菌 表达 系统相 比