4-甘油三酯.ppt.ppt

一、目的与要求 1、了解血清甘油三酯含量测定的正常值与临床意义 2、掌握血清甘油三酯化学法测定的基本原理及主要技术方法 三、操作步骤： 1、抽提 取三只小试管依次加入样品，TG标准液，蒸馏水，抽提剂及硫酸，充分振荡5min； 静置10min后，吸取上层液。 2、皂化反应 取三只大试管加入上层液，异丙醇及皂化试剂，混匀后，放置65℃水浴5min。 3、氧化显色 加入氧化试剂，混匀后加入乙酰丙酮并混匀， 65℃水浴15min，取出后于420nm处比色。 Lambert-Beer定律 实际测量过程中，用一已知浓度的标准液和另一浓度的待测液同样处理显色，读取吸光度，就可以得出下列算式。 A1=K1C1L1 A2=K2C2L2 A1、A2分别是标准管和待测管的吸光度 C1、C2分别为标准管和待测管的浓度 L1、L2分别为标准管和待测管的比色杯的光径 ∵ L1=L2 ；K1=K2　　 ∴ A1 C1 A2 A2 C2 四、 结果计算 ： C(TG)（ mg/ml ） =A测定管/A标准管*0.2*1 /0.2 C(TG) （ mg/dl ）=C(TG)*100 正常参考值为30-150mg/dl。 五、 注意事项： 1、 抽提时摇匀静置，待完全分层后才能吸取上层液，吸取上层液时不能吸入下层液，摇匀时勿将试剂撒出。 2 、选用小试管时试管口径不能太细，否则溶液过多不能振荡混匀。 3、甘油三酯平均分子量为885。 4、试管使用时需要干燥，清洗需要用洗涤剂。 分光光度计的使用 微量移液器的使用（加样枪） * * 实验二十六 血清甘油三酯含量测定 TG 3R(CH)2COOK 甘油 KOH皂化TG + 2HIO4 2HCHO（甲醛） +乙酰丙酮+铵离子 3, 5-二乙酰-1, 4-二氢二甲基吡啶， 与同样处理的标准管进行比色，可测出甘油三酯的含量。 氧化 二、原理： = C2 == A1 C1 1、打开分光光度计，预热20-30min。 2、调节旋钮至需要的光波长。 3、检查拉杆是否在分光光度计的休息状态。 调100% ：　Ｔ档　拉杆1档 空白管 调0% ： Ｔ档　拉杆2档 测吸光度： Ａ档　拉杆3、4、5档 标准管，测定管 休息状态： 拉杆2档 单通道数字可调式加样枪 多通道手动可调式加样枪 1、看清加样枪规格。 2、仔细调节旋钮至所需刻度。 3、安装枪头。 4、压至一档，吸取溶液。 5、放出溶液：压至二档。