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不同干燥方式的绣球菌中多糖提取工艺的优化 　　 摘要：本文对绣球菌进行多糖提取及其含量测定，通过单因素条件实验分析绣球菌的干燥方式，料液比，浸提时间，浸提温度对β-葡聚糖提取率的影响。在此基础上，设计正交法优化多糖提取工艺。由此确定了绣球菌多糖的最佳提取工艺条件。此方法快捷，准确，提取率较高，可作为绣球菌中多糖提取的方法。 　　关键词：绣球菌;β-葡聚糖;多糖检测 　　中图分类号：G642.3 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2016）41-0215-02 　　 绣球菌是名贵的食药用菌类，又名花椰菜菇、绣球菇、花瓣茸，隶属真菌类绣球菌科，含有十分丰富的多糖。因具有抗癌、免疫调节、提高造血功能等功效以及营养价值高，成为研究的热点。尤以美国、日本和韩国为甚，日本人称之为Hanabiratake，韩国称为Ggotsongyi。其研究者多为国外实验室，相关专利中并无中国项目。本实验为填补此空白，可为之后国内绣球菌有关产品的发展提供理论基础。 　　绣球菌中营养成分十分丰富，绣球菌多糖、腺嘌呤核酸、麦角固醇、超氧化物歧化酶等。在绣球菌的挥发油中共鉴别出49种成分，其中醋类含量最高，占30.63%，有机酸类含量次之，占27.89%，其次为醚（10.16%），醛（6.13%），烷烃（5.81%），醇酚（3.39%），酮（1.84%）等;其中有机酸类化合物种类最多，有12个，其次为烷烃（（11个）和醇酚、醋类（各6个）。 　　绣球菌中主要活性成分是β-葡聚糖（简称SCG），其含量非常丰富为菇类之最。日本食品分析化验所测定绣球菌β-葡聚糖含量为43.5g/100g干重，显著高于猴头菇、香菇、蛹虫草和草原黄蘑菇。其结构大多为6一分支，1，3-p一葡聚糖（SCG），Ohno等。通过化学、酶、和NMR分析发现这种葡聚糖的主链上每三个单元就有一个分支。 　　本文对不同干燥方式的绣球菌中多糖提取工艺进行优化，国内目前主要研究方向为大规模繁殖，对其提取工艺和深加工鲜有研究，因此对其最优化加工条件的研究是很有必要的。 　　一、材料与方法 　　（一）材料与仪器 　　新鲜绣球菌，LY0-1.0m2真空冷冻干燥机，GZX-9240MBE热风干燥机，葡萄糖，乙醇，硫酸，苯酚，以上试剂均为国产分析纯。 　　（二）提取工艺 　　1.干燥前预处理：新鲜绣球菌主要由柄基和子实体组成，人工切除绣球菌的柄基，将其子实体剪切成相同的体积，将新鲜绣球菌置于清水中清洗泥土等杂质，最后放置在托盘上沥干。 　　2.干燥：将新鲜绣球菌平均分成两份，分别放入热风干燥机和冷冻干燥机中干燥.将干燥后的绣球菌密封保存，防止受潮。 　　3.子实体多糖的测定：采用NY/T 1676―2008《食用菌中粗多糖含量的测定》中的苯酚硫酸法。 　　绣球菌多糖提取：采取水煮醇沉法，称取0.5g粉碎过20mm孔径筛的绣球菌样品，精确到0.001g，水溶超声，水溶浸提，即为多糖提取液，将多糖提取液进行减压抽滤、浓缩、4℃下醇析过夜、离心、弃上清液，所得沉淀用体积分数75%乙醇洗涤两次后，常规干燥后得绣球菌多糖，多糖用60℃蒸馏水溶解，将多糖样液稀释到适当体积测定其质量分数。 　　标准曲线制定：分别吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL标准葡萄糖工作溶液置于20mL具塞玻璃试管中，用蒸馏水补至1.0mL，向试液中加入1.0mL苯酚溶液，然后快速加入5.0mL浓硫酸，静置10min。使用涡旋振荡器使反应液充分混合，然后将试管置于30℃水浴中反应20min，于波长490nm处测吸光度，以吸光度为纵坐标，葡萄糖质量浓度为横坐标，制定标准曲线，得回归方程y=0.01861x+0.01642，R2=0.998。 　　绣球菌样品多糖测定：吸取1.00mL样品溶液于20mL具塞试管中，按上述步骤操作，测定吸光度，同时做空白实验，计算不同干燥方法绣球菌微粉样品中多糖含量得率。 　　（三）优化设计 　　1.单因素试验。以绣球菌多糖得率为指标，采用单因素试验确定影响提取效果的主要因素.单因素试验选取液料比20∶1、30∶1、40∶1、50∶1、60∶1（mL/g），每次提取时间2h，提取温度80℃，研究液料比对多糖得率的影响.对可能影响多糖得率的其他几个因素（超声时间、提取时间、提取温度、超声时间）分别做单因素试验，每组试验重复3次，取平均值。 　　2.正交试验设计。在预实验的基础上确定料液比、提取时间、提取温度三个因素.选用L9（34）正交试验设计，以绣球菌多糖得率为试验指标，来优化最佳的提取工艺条件，优化提取工艺的因素和水平。如表1所示。 　　二、结果与分析 　　由表2中正交试验结果可知，不同因素对真空冷冻干燥绣球菌提取的多糖得率的影响因大小顺序为：提取