大肠癌中VEGF、Ki—67和MVD的检测及其临床意义.docVIP

大肠癌中VEGF、Ki—67和MVD的检测及其临床意义 　　【摘要】 目的：探讨大肠癌组织VEGF、Ki-67的表达和微血管密度（MVD）及其临床意义。方法：应用免疫组化SP法检测60例大肠癌组织中VEGF、Ki-67的表达和MVD，并分析其临床特征及相关性。结果：大肠癌VEGF、Ki-67的阳性表达率分别为76.7%、73.2%，明显高于癌旁肠组织的35.0%、20.1%。两者比较差异均有统计学意义（P0.05）；VEGF阳性率在有/无淋巴结转移的大肠癌中差异显著（P0.05）；VEGF阳性表达组MVD值显著高于阴性组（P0.05）。结论：VEGF与大肠癌的发生、发展和转移密切相关，提示阻断VEGF通路将对大肠癌的治疗提供新的靶点。Ki-67是肿瘤良恶性鉴别、提示预后的重要指标。 　　【关键词】 大肠肿瘤； 血管内皮生长因子； 微血管密度； Ki-67 　　实体肿瘤的生长侵袭与转移依赖于新生血管的生成。对肿瘤血管生成机制的研究，目前主要集中于VEGF家族和具有调节血管生成作用的酪氨酸激酶受体[1]。所有促血管生成因子中，VEGF在血管生成过程中起着关键性作用。本研究应用免疫组化方法检测大肠癌组织及癌旁组织中VEGF、Ki-67的表达，并探讨VEGF表达与CD34计数的微血管密度（MVD）的关系，从而评价VEGF在大肠癌发生、发展中的作用。同时观察Ki-67在肿瘤及瘤旁组织中的表达及意义。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 收集安阳市第六人民医院和安阳市第二人民医院2009-2011年资料完整的60例大肠癌根治术标本，患者术前均未经过任何抗肿瘤治疗。其中男42例，女18例，中位年龄52岁；有淋巴结转移者33例，无淋巴结转移者27例。大肠癌按WHO（2005）分型及有/无淋巴结转移进行分组。另选取大肠癌癌旁组织20例作为对照组。 　　1.2 研究方法 全部标本经4%中性甲醛液固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片，HE染色。免疫组化采用SP法。鼠抗人单克隆抗体VEGF、鼠抗人单克隆抗体CD34、鼠抗人单克隆抗体Ki-67及免疫组化试剂盒均购自福建迈新生物技术开发有限公司。以同一条件下染色的阳性片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。 　　1.3 结果判定 VEGF、CD34定位于细胞质，以出现棕黄色颗粒为阳性细胞。阳性细胞数10%为（+）。CD34阳性的单个内皮细胞或内皮细胞簇被视为血管。先低倍镜下全面观察切片以选择肿瘤内4个血管着色最密集的区域，在200倍镜下用网格状目镜测微尺计数染成棕色的血管数目，取4个视野的均值作为MVD值。Ki-67以肿瘤细胞核出现明显的棕黄色颗粒为阳性，阳性细胞数1%～20%为（+），21%～50%为（++），50%为（+++）。 　　1.4 统计学处理 应用SPSS 10.0统计学软件对数据进行处理，计量资料以（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料采用 字2检验，以P0.05表示差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 VEGF的表达与临床病理参数的关系 VEGF在癌组织中的阳性表达率为76.7%（46/60），明显高于癌旁组织中的35.0%（7/20），两者比较差异有统计学意义（P0.01）。VEGF在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中的阳性表达率也不同，分别为87.9%（29/33）和63.0%（17/27），两者比较差异有统计学意义（P0.05）。在癌组织中，VEGF阳性细胞弥漫并多聚集成团。从整体看，癌旁肠组织中VEGF阳性反应强度和范围较癌组织明显减弱。VEGF表达与癌细胞的胞质呈弥漫颗粒状，见图1。 　　2.2 Ki-67与临床病理参数的关系 Ki-67在大肠癌组织中的阳性表达率为73.2%明显高于癌旁肠组织的20.1%，两者比较差异有统计学意义（P0.05）。Ki-67表达与癌细胞的胞核见图2。 　　2.3 VEGF阳性与MVD的相关性 46例大肠癌VEGF阳性表达组的MVD值为（38.32±12.65），14例VEGF阴性表达组为（29.63±9.3），两者比较差异有统计学意义（P0.05）。CD34定位于血管内皮细胞质，见图3。 　　3 讨论 　　肿瘤新生血管的生成过程中，VEGF被认为是最重要的促发因子，并与创伤愈合等生理性的新生血管形成有关。研究表明，VEGF具有促进内皮细胞分裂增殖，诱导毛细血管生芽、增加微血管通透性、促进内皮细胞迁移和抑制凋亡等多种作用[2]。VEGF-A可与VEGFR-1及VEGFR-2结合，但主要通过与VEGF-2结合发挥促血管生成作用[3]，缺氧引起细胞缺氧诱导因子1α和2α过表达，继而活化VEGF基因转录。同时突变的K-ras等癌基因、肿瘤抑制基因、一些生长因子及细胞因子等诱导VEGF的表达与分泌。本组研