参麦注射液细菌内毒素检查方法的探讨.docVIP

参麦注射液细菌内毒素检查方法的探讨 　　【摘要】 目的：考察参麦注射液细菌内毒素检查方法的可行性，加强对参麦注射液的质量监控。方法：采用细菌内毒素检查法，考察参麦注射液对鲎试剂的干扰试验，并检测供试品细菌内毒素的限度。结果：对样品进行1∶4稀释，用0.125 EU/mL鲎试剂无干扰，与家兔热源检查法结果一致。结论：与家兔法检查本品热原相比，细菌内毒素法可行性高，此方法避免了家兔热源检查法操作的复杂性，且灵敏度高、方便快捷。 　　【关键词】 鲎试剂； 参麦注射液； 细菌内毒素检查法 　　参麦注射液为红参和麦冬提取有效成分制成的纯中药注射液制剂，其中主要成分人参皂苷，是红参生理活性的物质，还含有机酸、甾醇、酯类和维生素类等[1]。从保健功能上讲，红参具有大补元气、益血、抗氧化、抗衰老、增强免疫力的作用。在药用功能方面，可以祛湿、治疗气虚、体寒症，如多汗、胃下垂、胸闷、心绞痛、冠心病、心血管等疾病；再如阳气不足、冬季畏寒、老人早衰、妇女内分泌紊乱等。麦冬的化学成分为甾体皂苷、异黄酮类、多糖、氨基酸等，具有抗心肌缺血、抗血栓形成、耐缺氧、抗衰老、降血糖等功效[2-4]。 　　参麦注射液具有益气固脱，养阴生津，生脉的作用。临床上用于治疗气阴两虚型休克、冠心病、病毒性心肌炎、慢性肺心病、粒细胞减少症。能提高肿瘤患者的免疫机能，与化疗药物合用时，有一定的增效作用，并能减少化疗药物所引起的毒副作用[5-6]。参麦注射液标准热源检查法为家兔法，但操作繁琐，灵敏度低，对细菌内毒素的含量不能准确检测。本文参照《中国药典》2005版附录动态比浊发建立参麦注射液细菌内毒素检查法的实验设计，以此法取代家兔法，用以检测参麦注射液细菌内毒素的限度，同时对其可行性分析并进行相关研究[7-10]。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验仪器 动态浊度鲎试剂（湛江安度斯生物有限公司，标示灵敏度0.125 EU/mL，批号130119，1.25 mL/支），细菌内毒素检查用水（中国药品生物制品检定所，批号130209，5 mL/支）；细菌内毒素工作标准品（湛江安度斯生物有限公司，批号121227，100 EU/支）；参麦注射液（雅安三九药业有限公司，批号121209，121217，130122；规格10 mL/支）BET-72细菌内毒素测定仪（上海昨非实验室设备有限公司），QL-901涡旋混合器（北京恒奥生物科技有限公司）。 　　1.2 方法 　　1.2.1 细菌内毒素限值（L）的确定 按照细菌内毒素限值（L）公式L=K/M[1]，K为依照规定给药途径，每人每公斤每小时最大可接受的细菌内毒素剂量，即致热阈。2010版中国药典规定我国内毒素标准品对人或家兔的致热阈为5.0 EU/（kg·h），M为人每千克体重每小时给药最大剂量（药品致热原检查剂量），参麦注射液热原检查剂量为10 mL/kg。细菌内毒素理论值（L）计算出为：L=0.5 EU/mL，本研究即采用0.5 EU/mL为细菌内毒素热源反应阈值。 　　1.2.2 鲎试剂灵敏度复核 按照2010年版中国药典附录细菌内毒素检查法的要求，进行鲎试剂灵敏度的复核[3]。以细菌内毒素检查用水溶解稀释细菌内毒素标准品工作溶液，混合涡旋混合15 min，后以1∶2分别稀释制备成以标示灵敏度为中间值的稀释液4份，每一步稀释后均混合涡旋30 min。每一浓度平行4支。 　　1.2.3 样品最大有效稀释倍数（MVD） 最大有效稀释倍数即在实验中供试品溶液被允许稀释的最大倍数，在不超过此稀释倍数的浓度下进行内毒素限值的检测。依照公式MVD=cL/λ求算[2]，其中L即参麦注射液供试品细菌内毒素限值，λ为鲎试剂标示灵敏度，即最低内毒素浓度，本动态比浊鲎试剂标示灵敏度为0.125 EU/mL，参麦注射液的最大有效稀释倍数根据L值即可求出为MVD=0.5/0.125=4。 　　1.2.4 干扰试验 按2010年版中国药典附录进行干扰试验[3]。将参麦注射液（批号121209）制备成原液，1∶2，1∶4，1∶8，1∶16五个系列浓度，每个浓度分别取0.1 mL样品进行干扰试验检查。分别制备两只阴性对照管（细菌内毒素检查用水和供试品溶液），以1：T（T为稀释倍数）稀释倍数样品分别对两批鲎试剂作干扰试验。 　　2 结果 　　2.1 鲎试剂灵敏度复核结果 实验结果为两批鲎试剂反应相同，灵敏度均为0.125 EU/mL。结果如表1，符合规定。 　　表1 鲎试剂灵敏度复核结果 　　鲎试剂批号 内毒素浓度 EU/mL 阴性对照 　　0.5 0.25 0.125 0.06 　　130119 + + + + + + + + + + + + - - - - - - 　　130317 + + + + + + + + +