冰冻解冻去甘油红细胞的手工密闭式制备方法的研究.docVIP

冰冻解冻去甘油红细胞的手工密闭式制备方法的研究 　　【摘要】研究在密闭环境下手工制备冰冻解冻去甘油红细胞的方法。方法 ACD-B抗凝剂全血制备的去白细胞悬浮红细胞中加入甘油，在-80℃深低温条件下保存；在37-40℃循环水浴箱中快速解冻；用9%NaCl和羟乙基淀粉40氯化钠注射液及0.9%NaCl溶液以渗透压梯度递减的方式进行洗脱，去除甘油。统计血红蛋白含量、游离血红蛋白含量、甘油残余量、白细胞残留量，与国家质量标准进行对比。结果是各项指标均达到国家质量标准，符合18469--2012《全血及成分血质量标准》。结论 手工密闭式制备冰冻解冻去甘油红细胞的方法成本低、安全可靠，值得中小型血站推广应用。 　　【关键词】冰冻解冻；去甘油红细胞；手工密闭式；洗脱； 　　随着我国人口的快速增长，医疗机构中血制品的需求也在急剧上升着。鉴于我国国情，靠无偿献血所获得的血制品往往不够使用[1]，尤其是稀有血型血制品更加稀缺，因此尽可能的延长血制品的保存时间是十分必要的。文献报道认为在血制品中加入适量的低温制剂可以显著延长其保存时间，在-80℃的低温下可以保存10年之久[2]，所以近年来冰冻红细胞技术广泛开展，我中心血站自开展RhD阴性红细胞低温保存技术，到目前为止平均每年制备冰冻红细胞80单位、解冻去甘油红细胞50单位，并用于临床输注获得成功，现报告如下： 　　1物料与设备： 　　1.1血液的来源： 由中心血站检验科鉴定为RhD阴性血型，血液检验合格，在4℃冰箱保存6天以内的去白细胞悬浮红细胞，以1单位为例。 　　1.2冰冻红细胞制备所需物料和设备：甘油保护剂（160ml/袋）、百特空袋（600ml）、一次性输液器、、百级净化间、多用调速振荡器、无菌接口机、热合机、微电脑配平仪、分浆夹、离心机； 　　1.3解冻去甘油红细胞制备所需物料和设备：融化好的冰冻红细胞、9% 氯化钠高渗盐水（80ml/袋）、0.9% 氯化钠溶液（500ml/瓶）、羟乙基淀粉40氯化钠注射液（500ml/瓶）、200ml空袋若干、一次性输液器、止血钳、百级净化间、无菌接口机、多用调速振荡器、热合机、电子秤、离心机、微电脑配平仪、分浆夹；2.操作方法： 　　2.1红细胞甘油化： 　　2.1.1分上清：将去白细胞悬浮红细胞用无菌接口机与百特空袋连接，将血液导入百特空袋内。置于离心机中，以3000rpm离心10分钟后，用分浆夹分离出上清液，热合断开弃去上清液，摇匀剩余压积红细胞。 　　2.1.2加注甘油：标示量为1单位去白细胞悬浮红细胞加入复方甘油溶液160ml。将甘油溶液袋的游离管路与输液器入口端无菌接合，将装有压积红细胞的百特空袋的管路与输液器管路无菌接合，通过输液器滑轮控制甘油滴速。最初甘油加入速度控制在约60滴/分，加入10分钟后调整至约120滴/分，甘油保护剂160ml在20-25分钟内全部滴完。加入甘油过程中将血袋以45度角放在振荡器上振荡，频率为200次/分。加注完毕后室温放置30分钟，并打印标签、电脑登记入库。 　　2.1.3冰冻保存：甘油化的红细胞放入特制防护纸盒内，放入-80℃速冻机进行速冻1小时后转入-80℃深低温冰箱保存，保存期为10年。即为冰冻红细胞。 　　2.2冰冻解冻去甘油红细胞制备： 　　2.2.1复苏解冻：从深低温冰箱中取出冰冻红细胞去除外包装盒，直接放于37℃-40℃循环水浴箱中解冻，融化时双手水平匀速摇动血袋，10-15分钟融化完毕。 　　2.2.2第一次洗脱：先将甘油化的血液离心后清除上清液，然后洗脱。用输液器连接血袋，首先加入首先加入9%NaCl 80ml，调节加入滴速（先慢后快），最初滴速控制在约60滴/分，10分钟后滴速控制在约110滴/分，20分钟内加完，平衡5分钟；再加入羟乙基淀粉40氯化钠溶液100ml，最初滴速控制在60滴/分，10分钟后控制在约110滴/分，20时分钟内加完，平衡5分钟。洗脱过程中血袋放在振荡器上振荡（200次/分），血袋与振荡器呈45°角；再以3000rpm离心10分钟后，置于分浆夹上去除上清液。 　　2.2.3第二次洗脱：加入羟乙基淀粉40氯化钠溶液100ml，20分钟内加完，平衡5分钟；0.9%氯化钠200ml，20分钟内加完，平衡5分钟，滴入速度及振荡条件同2.2.2；再以3000rpm离心10分钟后，置于分浆夹上去除上清液。 　　2.2.4第三次洗脱：加入0.9%氯化钠130-150 ml，滴速可加快，5-6分钟内完成，振荡条件同2.2.2；再以3000rpm离心10分钟后，置于分浆夹上去除上清液。 　　2.2.5第四次或四次以上洗脱：按照2.2.4方法操作，直到离心后上清液澄清，符合目视标准。 　　2.2.6最后一次洗脱后排出上清液，加入0.9%氯化钠