k88菌毛蛋白aeg基因的克隆、表达及单克隆抗体的制备.pdfVIP

任士飞 K船曹毛蛋白FleG基因的克隆、衰迭及单克窿抗体制备1 K88菌毛蛋白FaeG基因的克隆、表达 及单克隆抗体制备 研究生：任士飞 导师：徐建生、孙怀晶 专业：预防兽医学 中文摘要 Escherichiacoli，ETEC)引起的仔猪、 由产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic 犊牛和羔羊腹泻是幼畜的一种最常见病，在世界范围造成严重的经济损失。ETEC 菌株的致病前提是通过细菌表面的黏附素与宿主黏膜上皮细胞表面的相应受体结 合，从而在该局部组织定居、繁殖、产生毒素或侵入深部损伤或破坏组织，引起 疾病或造成隐性感染。 本研究根据已发表的F4菌株faeG基因序列设计引物，用PCR扩增法从六株 标准F4菌株中扩增出O．8kb的faeG基因序列，通过测序和序列分析比较，所获核 苷酸序列与已发表的标准F4菌株序列同源性大于95％，个别核苷酸差异可能由于 菌株不同所致。将不含信号肽的faeG片段按正确的阅读框架克隆入pGEX一6p-l载 体中的谷胱苷肽～G一转移酶(GST)基因下游，用IPTG诱导实现其在大肠杆菌中的 4B亲和层析提纯后免疫 将原核表达产物经复性和谷胱苷肽活化的Sepharose BALB／c小鼠，获得针对FaeG的单克隆抗体3株，单抗腹水的ELISA效价为2“， 蛋白转印杂交结果表明此单抗仅与融合蛋白反应，与载体蛋白不反应，为ETEC 对小肠上皮细胞的黏附机理研究、免疫诊断试剂和基因工程疫苗的研制打下了基 础。 Escherichia coli，ETEc)；黏附素；PCR 关键词：产肠毒素大肠杆菌(Emerotoxigenie 扩增；序列分析；原核表达；单克隆抗体 三 塑型查兰堡圭兰垡笙茎 ofK88Fimbrial Cloning，ExpressionSubunitfaeG Geneand ofIts Monoclonal Praparation Antibody M．D．Candidate：ShifeiRen Xu Supervisor：Prof．Jiansheng Sun Prof．Huaichang Abstract themost in Escherichiacoliisoneof importantpathogensyounganimals，causing or of Escherichia disease diarrhea、oedema colisepticemia．Infectionenterotoxigenic diarrheaand has a causeof d