mrna差异显法研究密叶杨#215;胡杨nahcolt;,3gt;胁迫下基因的表达（国家“973”项目树木分子育种—耐盐基因克隆部分）.pdf

摘 要 为了研究胡杨耐盐碱的分子机理，以正常生长和用4％NaHCO，(W／V)处理过的胡杨 为研究对象，利用mRNA差异显示(DDRT-PCR)技术，通过Reverse Northern杂交 获得差异表达片段，并对基因片段测序和序列分析等研究。所得结果如下： 天后，取胡杨叶片进行mRNA差异显示，研究表明NaHCO。溶液处理后出现基因的 差异表达。 ． 快速、可靠的树木RNA提取方法。 (3)建立了胡杨的mRNA差异显示的体系。利用三种锚定引物和16种10碱基随机引 物组合，展示了胡杨正常条件下和盐碱条件下基因表达差异方式。用银染法代 替了放射性标记检测，操作起来更安全易行。该方法与ReverseNorthern斑点 杂交结合使用，并进行多次重复操作，可很好地克服其假阳性高的缺点。 (4)共获了24个差异条带的克隆。经ReverseNorthern杂交获得了4个阳性克隆。 对其进行测序，序列相似性分析表明T12C—P1片段与atpH基因(该基因编码 蛋白序列同源性较低：T。2c—AP4序列与WD一40重复蛋白基因同源性较高； TnA-AP4片段与钠离子通道蛋白基因有一定同源性，为抗盐碱相关基因。 Northern杂交 关键词：胡杨，mRNA差异显示技术，耐盐碱基因，Reverse ABSTRACT Inorderto mechanismofsaltandalkalitolerancein themolecular analyze Populus eDNA were euphraticaOliv,differentiallyfragmentsseparated，andsequenced displayed as methodof aftertheReverseNorthernDot well the through Blotting，asanalyzed with DDRT—PCRtheresultsasfollows： resultshowedthatsome were DDRT—PCR，the specialgenes induciblyexpressed (1)By of three inleaves undersaltandalkalistresswith solutionfor 4％NaHC03 days Oliv． euphratica Populus from inDD-RTand thetotalRNAthis methodis idealtoextract