j亚型禽白血病l-2株病毒的分离鉴定及gp85基因的克隆与表达.pdfVIP

摘要 摘 要 leukosisvirus J亚群禽白血病病毒(Avian J，ALV-J)是20世纪80年代 Subgroup leukosis 末在英国发现并鉴定的一个禽白血病病毒(Avian virus，ALV)亚群，它主要 引起肉鸡的骨髓瘤白血病，给养禽业造成很大的损失。已知ALV-J的囊膜蛋白决定病毒 的表型和病毒中和反应类型，其中由gp85基因编码的病毒囊膜表面糖蛋白(Surface Subunit，SU)决定病毒的亚群。 本实验采用AL、，．J特异性引物，用RT-PCR的方法从吉林省某种鸡场送检的种鸡体 内，检出一株AL、，-J病毒。遂将此ALV-J分离株命名为儿_2株。此株病毒通过CEF增 殖后。提取宿主基因组作为PCR反应的模板，根据GenBank中多株AL、，-J病毒基因的 6．0软件设计了一对引物，扩增出包括gp85基因在内的大约1700bp 完整序列，利用Oligo 核酸序列。将其插入克隆载体质粒pMDl8．T中，构建了重组质粒pMDl8-T-几．2／env， 并对克隆的env基因进行序列测定。结果表明，所测序基因中gp85基因全长924bp，编 码308个氨基酸，分子量为34Ku。计算机辅助分析表明，与ALV-J原型株HPRS．103 相比，几．2株病毒除了在585到595位核苷酸处出现9个核苷酸的插入外，整段基因比 的同源性为86％。遗传分析表明，JL-2病毒株极有可能起源于美国的Adol-hc．1病毒株。 本实验根据原核表达载体pGEX一60—1的酶切图谱．设计了另一对引物，用细胞培养 物提取的基因组为模板，扩增了前病毒gp85基因。将此段基因亚克隆到表达载体 融合蛋白，光密度扫描对表达产物进行初步定量表明，60Ku融合蛋白占菌体总蛋白的 31．8％。通过Western-blot实验对表达产物进行反应原性分析，结果表明所得融合蛋白具 有很好的抗原反应特异性。 本研究首次分离并鉴定了AI v_J地方分离株几．2株病毒，克隆了JL．2株病毒gp85 基因全序列，并与国内外参考毒株进行了比较分析。在此基础上，成功地表达了gp85 基因，为国内ALV-J病毒的分子流行病学调查、分子诊断试剂的开发以及基因工程疫苗 的研制提供了理论依据和物质基础。 关键词J亚群禽白血病病毒：gp85基因；分离鉴定：克隆；原核表达 V IsolationandCharacterizationofJL．2StrainofAvian virus and leukosis JandIts Gene Subgroupgp85 Cloning in EscherichiaColi Expression Abstract andwasidentifiedinl AvianIeukosisviIRiS saretrovirus J(AIv．J)i 990s’， Subgroup whichinfects andcausesserious chickens meat—type economicIOSSeS．Envelopeglycoprotein virus ofALv-Jdetem