igf-ⅰ、gp-ⅰ、乳酸对体外培养新生牛脂肪细胞hsl mrna丰度和酶活性的影响.pdf

⑧_坷震Jt上∥研士∥篮静冀 [GF-I．GLP-1．1Lt对蚌，}暗拳．1t牛靠精■鼍HSLmRNA丰t和謦话挂曲番嘲 摘 要 实验选取临床检查无异常的新生荷斯坦犊牛颈动脉放血致死，无菌开腹切取腹腔 内小肠网膜约609，D-Hank’s液洗涤，分离去除脂肪组织中肉眼可见的纤维成份及 血管，按照本实验室建立的犊牛前脂肪细胞培养方法进行脂肪细胞的原代单层培养， 整个培养期为14d。培养至第8、12d，用油红O工作液和台盼蓝工作液对脂肪细胞分 别进行染色，以便观察其形态；第14d，选取体外培养单层生长良好的脂肪细胞，在 20倍稀释后用PharmaciaBiotech公司的RNA／DNA RNA含量差异，确保定量精确性)。将常规RT—PCR扩增HSLmRNA模板的纯化产物进 行质粒的重组、克隆和序列测定。用灭菌纯水将以上重组质粒按梯度稀释后作为荧光 PRISM7000 定量PCR反应的阳性标准模板，按己建立的PCR反应体系和条件在ABI PRISM 酸处理的脂肪细胞总RNA的反转录产物以标准曲线为参照在ABI 7000型荧光 酸处理的脂肪细胞HSLmRNA丰度的变化。IGF—I、GL卜I、乳酸处理的脂肪细胞在 低温操作室参照南京凯基总蛋白提取试剂盒提取细胞总蛋白，采用华特生蛋白定量试 剂盒测定所提细胞总蛋白浓度，最后用南京建成脂肪酶测定试剂盒测定IGF-I、GL卜 I、乳酸处理的脂肪细胞BSL活性变化。数据同样用SPSSl0．0软件统计分析。实验 结果表明：1．IGF-I、GLP-I、乳酸对HSLmRNA表达的抑制作用存在剂量依赖性。 mRNA的 mRNA表达及HSL活性而抑制脂肪的分解。从 乳酸可通过抑制奶牛脂肪细胞内HSL 而促进骺肪沉积。 ④_可农Jt上萨研士铲罐静冀 IGF-I．G／P-I．t|峙体外畦拳．}t牛蠕稚-毡HsLnLRNA丰t和碡謦性赫番★ EffectsofIGF．I、GLP．IandLacticacidon ofHSLmRNAand ofHSLinVitroCnlture Activity Bovine Adipocyte - 一 Veterinary Qianhui(ClinicalMedicine) Directed byDengJun-Liang Abstract Inthis andneoformtiveHolstancalveswerecausedtodeath experiment,the healthy arteriacarotis．About ofintestinawastakenfrom throughcutting 609epiploon parva abdominalwithoutcontaminate．Afterwashedwith fiberand cavity being