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高速逆流色谱（HSCCC） 中药分析专题 HSCCC的发展 CCC（counter-current chromatography） 二十世纪40-50年代的逆流色谱技术的伟大先锋： Dr. Lyman C. Craig at the Rockefeller Institute Craig博士制造了一台非常复杂的过个玻璃管组成的仪器，可以完成数百次的相交换。制造了多台这种仪器并销往世界上的很多实验室，通常称为“Craig机器” 30支和1000支管的逆流分配行列 这种仪器的组装、运行和维护非常枯燥和复杂，因此并未普及。 一些年后，日本的Yoichiro Ito先生，在旋转聚四氟乙烯螺旋管离心法基础上研制了一种新型的逆流色谱仪器。 High Speed Counter current Chromatography Yoichiro Ito（伊东洋一郎）等首先在日本，随后在美国国立卫生研究院（National Institute of Health,NIH）的研究中发现，互不相容，密度不同的两相溶剂在绕成螺旋形的小孔径管子里分段割据，并能实现两溶剂之间的逆向对流。 我国还是继美国、日本之后最早开展逆流色谱应用的国家, 也是世界上高速逆流色谱仪生产国之一。HSCCC被北京新技术应用研究所的张天佑教授和上海同田生化技术有公司的邓秋云先生进一步改进。 HSCCC利用了一种特殊的流体动力学(单向流体动力学平衡)现象 Diagram 两种基本逆流色谱体系比较 项目 HSES HDES 螺旋管运动 静止 绕自身轴线运动 功能的对称性 对称 不对称 移动相洗脱方向 从任一端引入 只能从引入端 分配效率 较低 较高 固定相保留值 接近50% 转速、两相界面张力有关 两相界面面积 较小 较大 两相混合作用 缓和 强烈 有效管柱空间 50% 100% 系统示意图 固定相的保留是在两个力的平衡状态下实现的 独特的正相和反相双向分离洗脱 HSCCC 分离效果与仪器参数和溶剂体系的选择关系密切，其中溶剂体系的选择是至关重要的一步，占总工作量的90.0％ 高速逆流色谱条件选择 溶剂系统、螺旋管转速、流动相流速、固定相保留量等 （1）两相溶剂系统选择方法 不同组分在上下相中的分配有差异，分配系数K不同，测K TLC法：样品在等体积上下相中分配达到平衡后，TLC展开，斑点大小或颜色深浅，判断各组分在两相间的分布状况 HPLC： 样品溶于一定体积的某一相中（上相U），HPLC测定U相，AU1 加入一定体积的另一相（下相L），平衡后HPLC测定U相，AU2 （2）溶剂系统 （3）螺旋管转速 螺旋柱的旋转速度对两相的混合程度具有决定性影响作用，同时它产生的离心力场对固定相的保留也具有决定性的影响作用．两相溶剂系统的相分布与转速的关系示意图． （3）固定相保留量 固定相的量是影响溶质峰分离度的重要因素，一般来说，高保留量会大大提高峰分离度。 溶剂系统的物理特性如界面张力、粘度和两相之间的比重差与固定相的保留值有密切关系。 在溶剂系统的各个物理参量中，粘度对固定相的保留值起主要的影响作用，低粘度的溶剂系统可望得到高的固定相保留值， 而高粘度的溶剂系统的固定相保留值较低。 通常应尽量加大比重差和减小粘度。 HSCCC内部示意图 仪器流程 HSCCC的优点 HSCCC的应用 HSCCC在天然药用植物活性成分分离及标准品制备中的应用 HSCCC的操作过程 HSCCC分离丹参水溶性化合物 HSCCC制备延胡索中的生物碱 分析型HSCCC在快速分离和中药指纹图谱分析中的应用 分析型HSCCC与制备型HSCCC之间应该说没有 严格的界定,但是通常将螺旋管柱内径≤1mm,柱体积≤50mL的多层螺旋管行星式管离心分离仪(multilayer coil planet centrifuge, MLCPC)称为分析型高速逆流色谱仪。 优点：柱体积小,分离速度快,溶剂消耗量小 应用：溶剂体系的快速优化、