PET滤膜用于承载耳蜗基底膜培养的实验研究.pdfVIP

· 76 · ChineseJournalofOtologyVol.13,No.1,2015 ·内耳研究专辑 · PET滤膜用于承载耳蜗基底 膜培养的实验研究 刘永泽 周函 麻晓峰 马登滨 高下 南京大学医学院附属鼓楼医院耳鼻咽喉头颈外科 （南京 210008） 【摘要】目的探讨一种适宜耳蜗组织贴壁培养的方法。方法 PET滤膜预先置入层粘连蛋白、鸟氨酸、胎牛血清按2: 2:1比例混合均匀的液体中在4℃预孵过夜，选取出生四天的C57BL/6J小鼠作为研究对象。剥取基底膜以PET滤膜作为承 载介质培养在加入含青霉素的培液中，48小时后收取样本，进行免疫荧光（一抗goatanti-otoancorin、mouseanti-betatubu⁃ lin Ⅲ及对应二抗采用cy3donkeyantigoat，647donkeyantimouse，染核试剂DAPI，phalloidin)观察不同部位细胞，扫描电镜 及制备原位超薄切片透射电镜观察体外培养新生小鼠基底膜内外毛细胞、螺旋缘内细胞、螺旋神经元细胞显微结构的改 变。结果耳蜗基底膜在PET膜上贴附生长良好。各种细胞的微小结构和超微结构保持正常状态。 结论PET滤膜能作为一种新颖的承载基底膜培养的介质。 【关键词】聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)滤膜;耳蜗器官培养;毛细胞;齿间细胞;免疫荧光;透射电镜;扫描电镜 【中图分类号】R764.35 【文献标识码】A 【文章编号】1672-2922 （2015 ）01-03-076 Polyethylene Terephthalate Membrane Used as a Holder for Cochlear Organotypic Cultures LIUYongze,ZHOUHan,MAXiaofeng,MADengbin,GAOXia OtorhinolaryngologyDepartment,DrumTowerHospital,NanjingUniversity SchoolofMedicine，Nanjing，210008，China Corresponding author:GAOXia,Email:xiagaogao@ 【Abstract 】Objective Toreportapracticalmethodfortissueadhereincochlearorganotypiccultures. Methods The polyethyleneterephthalate(PET)membranewasprecoatedwithlaminin,poly-L-ornithine,andfetalbovineserumataratioof 2:1:1 overnight.Thecochlearbasilarmembranewasmicro-dissectedfromC57BL/6Jmousepupsatpostnatalday 4,and placedonthePETmembraneinaculturemediumcontainingDMEM, 10%fetalbovineserum,and30U/mlpenicillin.After48 hours,thecochlearspecimenswerefixedwith 10%formalininPBS.Anti-otoancorinandanti-tubulin Ⅲantibodiesweredou⁃ blestainedforlabelingofnonsensorycells,interdentalcellsintheinnerearandaudito