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应用PCR—DGGE技术分析泡菜中乳酸菌的多样性 付琳琳 曹郁生 李海星 陈 燕 (南昌大学中德联合研究院食品科学教育部重点实验室，南昌，330047) 摘要从泡菜液中抽提总DNA．扩增16SrDNA的v7一V8区，变性梯度凝肢电泳分离PCR片段，发现不同样 品间的菌种差异显著。对片段直接测序和克隆测序，进行Blast分析，绘制进化树。结果表明．DGGE和克隆技 术相结合是研究泡菜中乳酸菌多样性的可行方法。 关键词 泡菜，多样性，PCRDGGE，乳酸菌 50 自从Muyzer_11首次将PCR—DGGE技术用于研液洗涤菌体3次，加入145L裂解缓冲液，40 pL 究微生物多样性以来，近年来DGGE己被广泛应用mg／mL的溶菌酶，15u的变溶菌素，37℃保温3h， 于各种环境微生态的研究，如高温热泉、湖泊、江河、 加入400 CTAB缓冲液，20 pL pL20mg／mL的蛋白 海洋、根际、土壤、沙丘等。在国外，PCR—DGGE广 酶K，50℃保温2 泛用于研究食品微生态，鉴定微生物，评价食品质量， 如益生菌制品、2l、酸面团旧』、干酪_41等。国内尚未见 到将PCRDGGE用于食品微生态研究的报道。本 h。 10mg／mL的RnaseA，37℃保温3 文首次利用DGGE技术对家庭泡菜中乳酸菌的多样1．3 PCR扩增 性进行了初步研究。 mmol／L 液5 dNTP3 PCR引物 1材料与方法 ftL，2．5 pL，5kLmolZL 各2弘L，Taq酶2．5pL，模板DNA3pL。采用降落 1．1材料 PCR进行扩增：94℃预变性2rain；94℃30S，60℃60 1．1．1样品的采集与处理 s，72℃60S，退火温度每两个循环降低1．5℃，当退 样品采自不同家庭制作的成熟期的泡菜液，用4 火温度降至54℃后，再以该温度扩增25个循环；最 层无菌纱布过滤取清液。 后72℃补平15 1．1．2参考菌株 胶进行电泳，割胶回收月的条带。 乳酸乳球菌乳脂亚种1．9(Lactococcus．1actis 1．4变性梯度凝胶电泳(DGGE) subsp．cremorls1．9)， 嗜热链球菌1．1855 1．1855)，干酪乳杆菌 (Streptococcusthermophilus 行电泳，恒压20V，10min，然后130V，4h，银染。试 casei 1．574(Lactobacillus1．574)，购自中国微生物剂盒倒收片段。 菌种保藏中心。 1．5直接测序和序列分析 5o 1．1．3PCR引物L 以回收产物为模板，进行PCR扩增，送上海生工 P1：5’一GT
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