应用噬菌体展示技术筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5ATP9启动子DNA结合蛋白.pdfVIP

363 生耍匡熊盒匪瘟寥蠢2螋2生篁』≥鲞塑垦塑 应用噬菌体展示技术筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A 反式激活基因NS5A—TP9启动子DNA的结合蛋白’ 巨立中1钟彦伟2成军2 1中国人民解放军第273医院(新疆库尔勒，841000) 2．中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中一C 摘要目的：筛选丙型肝炎病毒(卜K、v)非蛄构蛋白NS5A反式激活基因NS5A—TP9启动子DNA结合蛋白，探 索Ns5A_TP9的表达调节机帝3。方法：应用啦茵体展示技术，以聚合酶链反应(PcR)技术扩增的Ns5A_TP9启动千 I)NA片段作为固相筛选分子，对噬茵体人肝细胞cDNA文库进行4轮“吸附．洗脱一扩增”富集过程．噬斑裂解液P(R 扩增后，回收产物构建克隆栽体，对所筛选克隆进行DNA序列分析和同源性生物信息学有哪些信誉好的足球投注网站。结果：噬茵体经富集 后，筛选出10个阳性克隆，成功构建了克隆载体。序列刹定后经过同浠一胜有哪些信誉好的足球投注网站，确定了与H(Ⅳ非结构蛋白NS5A反 式激活基因NS5～’I’P9启动子DNA结台的蛋白有：补体C3、甲胎蛋白、人血清白蛋白、人核耱体蛋白20s和nl微球 析了这些蛋白的功能，为研究NS5A—TP9基因的转录调节机制，进一步阐明HCV非结构蛋白NS5A的致病机制奠定 了基础。 关键词分子生物学；噬茵体展示技术；肝炎病毒，丙型；启动子；DNA结合蛋白；筛选 of ProteinofNS5A·TP9Gene Dis- Promoter byPhage Screening DNA-Binding fromHumanLiVercDNA playTechnique Library 』uLi曲otfgl，2M)M：地，z删2，口丑丑v(；J㈣2．1．nP 2(知le The州攀R删Hho，ltcr．IHsn}舭Uflf缸埘Ⅲu则删．The302№s瓶“可。删∞PIA ofN甾A—TP91)NAtran龃ctlvated CⅥrusmmstmc— AlWtract(M畸“tlve：sc础“pr∞1merbindjllgpn)tdn byh印at：tls 5A hLlmanlivercDNA a兀d the mechanlsnlofthenew byus¨19 libraryjnv墨tj吕atee。preSsion衄d gene tum】prot画n regulati(m of e【】 Ns5A硼．Methods：TksequenceNS5A-TP9 r鼢ct；0n¨)cR)孙select pmnloter aIllpli“副byp。lym㈣chaln moIecuk．theT7sel州humml and llv盯cDNA】jbrfl叫v，a3biop．血nedp嘴itlveclon船we础se】ec涮．～【盯scr。e∞lng，p。s…ve Io c10ned IO w盯eck*印forDNA pkquewere舭“硼1edaInpljfy柚diIn()pGEM-1、髓叫v篦tor，p。Sltiveplaque in Rmnd 9equenang，R爆uI乜：Ah盯BLAsrclon姻，we that。ompl百n心to。mp(】r吼t3，缸pba_fetopt咀en卜b㈨ a【l晒nve