硒化壳聚糖诱导人早幼粒白血病细胞凋亡地研究.pdfVIP

NO．5 MEDICINEANDI～IATERIAMEDIcARESEARCH2010VOL．21 时珍国医国药2010年第21卷第5期LISHIZHEN 硒化壳聚糖诱导人早幼粒白血病细胞凋亡的研究 邓守恒，曹凤军，蔡晓军，王贤和，陈萍’ (郧阳医学院附属人民医院肿瘤中心，湖北十堰442000) 摘要：目的探讨硒化壳聚糖对人早幼粒白血病细胞增殖及凋亡的影响。方法应用SRB法和集落形成法检测硒化壳聚 糖对人早幼粒白血病细胞增殖的抑制作用；应用流式细胞法检测药物对细胞的促凋亡作用；应用Westernblot法检测W．11 蛋白表达的情况。结果25，50，100 me．／ L硒化壳聚糖作用细胞48 h后Wn蛋白 20．1％(P0．05)，凋亡率分别是(6．7±1．6)和(11．8±2．1)；50，100mg／L硒化壳聚糖作用HE60细胞48 作用，wTI在此过程中可能发挥着重要的作用。 关键词：硒化壳聚糖；早幼粒白血病；凋亡 中图分类号：R961 文献标识码：B 文章编号：1008-0805(2010)05一1178旬2 壳聚糖[13(1，4)一2一氨基一2一去氧一D一葡萄糖]是存在96孔细胞培养板，每个浓度复种4孔，每孔180“l，每孔加入不同 于自然界中的一种碱性生物多糖，在酸性条件下带正电，与肿瘤 浓度硒化壳聚糖20斗l，对照组加入同量培养液，置37℃，5％ 细胞表面的阴离子可以通过吸附放电进行中和，抵制其生长，具 CO，，饱和湿度的培养箱中孵育48h后，每孔小心加入预冷的 min后再将平板移至4。C放置1h，倒掉固 有抗肿瘤、抗炎、抗菌等多种生物活性L“，且生物相容性良好，几 80％醋酸50恤l，静置5 SRB 乎无毒性，没有其它不良反应，在现代药物制备中经常作为良好 定液，用去离子水洗5遍，甩干，空气干燥，每孔加入100斗l 的药物材料进行开发，拓展其应用范围，硒化壳聚糖’“是将壳聚 液，室温放置10 10 糖与亚硒酸在酸性条件下，以混合金属离子为催化剂，通过拼合 气干燥，结合的SRB用150斗l 原理制备而成的一种有机硒，可有效克服无机硒不易被细胞吸 (pHlO．5)溶解，酶标仪检测550nln波长光密度并计算抑制率， 收，活性和毒性范围较窄，致死量相对较小等缺点一J。目前正对 实验重复3次。 其抗肿瘤作用进行研究。硒和砷属同族，而三氧化二砷在临床上 2．3 H瑚细胞克隆形成实验”3参照文献配制半固体培养基， 早已做为一种抗早幼粒白血病药物使用，故硒化壳聚糖也应具有 HlfaO细胞经不同浓度硒化壳聚糖作用48h后，PBS洗去药物， 抗旱幼粒白血病的作用，且毒副作用应该比无机硒和砷小得多。 离心1000r／rain×3 全培养液稀释为7．0 本实验以人早幼粒白血病细胞株HI_riO为靶细胞，观察了硒化壳 聚糖对其产生的诱导凋亡作用并探讨了可能的作用机理，为硒化 板预加1．2％甲基纤维素培养基1．0ml／j：1．，加入单细胞悬液50 壳聚糖用于治疗人早幼粒白血病奠定基础。 出，使每孔细胞数为350个，每个浓度设4个复孔。混匀后置 l材料与仪器 37℃，5％CO：，饱和湿度的培养箱中孵育10—12d后于倒置显微 1．1试药试剂硒化壳聚糖(批号：100601—200518)由本院自镜下计数细胞克隆数，计算细胞存活率(给药组平均克隆彬对 blot试剂盒为P